GLOBIN GENLERINDEKI MUTASYONLARIN

1
GLOBIN GENLERINDEKI MUTASYONLARIN YENI
MOLEKÜLER GENETIK TEKNIKLERLE TESPITI Doç.
Dr. Ibrahim KESER keser_at_akdeniz.edu.tr Akdeniz
Üniversitesi, Tip Fakültesi Tibbi Biyoloji ve
Genetik Anabilim Dali Moleküler Genetik
Laboratuvari ve Talasemi Tani, Tedavi ve
Arastirma Ünitesi Antalya-TÜRKIYE
2
DÜNYADA VE TÜRKIYEDE HEMOGLOBINOPATI VE
TALASEMI
3
Talasemi ve hemoglobinopatiler, artik global
problemlerdir. Dünyada talasemi ve anormal
hemoglobin sikligi 5,1 (WHO)
Dünyada yaklasik 270 milyon tasiyici var. 60.000
hasta çocuk dogumu /yil (TIF)
4
Türk toplumunda beta- talasemi tasiyici sikligi
2.1, bölgelere göre 0.6-13.
HbS Türkiyede 0.37-0.6 siklikta olup, sorun
olan bir hemoglobinopatidir. Türkiyede en sik
Manavgat/Antalyada görülmektedir. Dünyada nadir
görülen Hblerden 5 tanesi ilk defa Türkiyede
yayinlanmistir.
5
(No Transcript)
6
TALASEMI Talasemi, hemoglobin molekülündeki
mutasyonlarla karekterize, otozomal resesif geçis
gösteren kalitsal bir kan hastaligidir. En
yaygin tipleri Alfa- ve Beta-Talasemidir.
Türkiyede en çok görülen tipi Beta-talasemidir.
Beta-globin geninin mutasyonu sonucu meydana
gelir.
7
Alfa- ve Beta-Talasemi için 1.200den fazla
farkli mutasyon belirlenmistir. Dünyada
bulunmus olan mutasyonlarin 80ini yaklasik 20
farkli mutasyon olusturur. Cografik
populasyonlar mutasyon spesifitesi
gösterebilir. Talasemi sikligi akraba evliligi
ile artmaktadir. Antalyada akraba evliligi
orani 35.17 dir. Bizim çalismamizda akraba
evliligi orani 27 olarak bulunmustur.
8
Antalyada beta-talasemi tasiyici sikligi 13.1
dir.
9
p15.5
p13.3
10
(No Transcript)
11
(No Transcript)
12
(No Transcript)
13
(No Transcript)
14
MATARYEL VE YÖNTEM
15
HASTA AKISI AKDENIZ ÜNIVERSITESI TIP FAKÜLTESI,
TALASEMI TANI, TEDAVI VE ARASTIRMA
ÜNITESI ANTALYA DEVLET HASTANESI, TALASEMI
ÜNITESI ANTALYA ATATÜRK DEVLET HASTANESI MERKEZ
ILÇE DEVLET HASTANELERI SERBEST ÇALISAN HEKIMLER
ANTALYA ILI BELEDIYELERININ YÖNLENDIRMESI
16
TARAMA PROGRAMI KLINIK TARAMA KLINIK
LABORATUVARI PERINATOLOJI GENETIK
LABORATUVARI
17
ÖRNEK ALIMI KAN CVS (9-11 GH) AMNIYOTIK SIVI
(15-16 GH) KORD KANI (20-22 GH)
SITOGENETIK ( Kromozom Analizi )
MOLEKÜLER GENETIK ( Mutasyon Analizi )
KAYIT- DNA BANKASI
18
MOLEKÜLER GENETIK TANI YÖNTEMLERI
Talasemiler, globin zincirlerindeki sentez
bozulmasina göre a, b, g, d, db, egdb
olarak isimlendirilirler. Türkiyede en sik
görülen tipi b-Talasemidir.
19
Globin Geni Moleküler Genetik Analiz
Yöntemleri DNA IZOLASYONU Kan, CVS,
Amniyotik Hücreler, Kord Kani
PCR Bilinen Mutasyonlar Bilinmeyen
Mutasyonlar ARMS-PCR PCR-SSCP REA (
RFLP ) DGGE RDBH DHPLC Dot-Blot
HDA Gap-PCR TTGE PCR-ASO
Microarray RT-PCR DNA DIZI ANALIZI
AS-APEX Pyrosequencing
NANOCHIP VNTR
20
ARMS
21
RFLP
22
RDBH
23
Gap-PCR
24
PCR-SSCP
25
PCR-SSCP
Sekil-1. 6 V/cm (72 V), 15 saat, 9 C.
26
TTGE
27
DHPLC
Column, PS/DVB monolith, 50 x 0.20 mm i.d.
mobile phase, (A) 100 mM TEAA, 0.1 mM Na4EDTA, pH
7.0, (B) 100 mM TEAA, 0.1 mM Na4EDTA, pH 7.0, 25
acetonitrile linear gradient, 30-50 B in 3.0
min, 50-70 B in 7.0 min flow rate, 3.0 µl/min
temperature, 54.7-59.8 C detection, UV, 254 nm.
28
DHPLC- APEX- DNA DIZILEME
29
MICROARRAY
30
NANOCHIP
31
DNA DIZILEME
32
VNTR için ApoB MCT Ig-JH D4S95 16 STR (ABI )
33
SITOGENETIK
34

• Globin Geni Moleküler Genetik Analiz
  Yöntemlerinde
• Fiyat-Etkinligi
• DNA IZOLASYONU
• PCR
• Bilinen Mutasyonlar Fiyati
  Bilinmeyen Mutasyonlar Fiyati
• ARMS-PCR 50 YTL PCR-SSCP 50 YTL
• REA ( RFLP ) 60 YTL DGGE 50 YTL
• RDBH 1000 YTL/22 mutas. DHPLC 20
  YTL/Injeksiyon
• Dot-Blot - HDA -
• Gap-PCR - TTGE -
• PCR-ASO - Microarray -
• RT-PCR - DNA DIZI ANALIZI 319 YTL
• AS-APEX -
• Pyrosequencing -
• NANOCHIP 400 YTL/ 147 Mutasyon

35
BULGULAR-TARTISMA
36
2000- 2007 NISAN 276 fetus için prenatal tani
sonucunda I- Sitogenetik 1 Fetus
46,XY/47,XY,22 ve IVSI-110 / IVSII-745 1
Fetus 45,X ve Normal/Normal CPM
eliminasyonu için Amniyosentez yapildi, sonuç
yine ayni idi. Aileye danisma verildi.
37
47,XX,21 ve IVSI.110 / IVSII.745 Keser et al.
Ann Genet, 4457-58,2001
38
II- Moleküler Genetik 2000-2007 Nisan
Moleküler Genetik Laboratuvari Sonuçlarimiz
HASTA TASIYICI NORMAL TOPLAM
73 133 70 276 Tani
sonrasi ailelere genetik danisma verilerek,
ailelerin yazili izinleri ile hasta fetuslar için
teröpatik abortusa gidildi.
39
IVSI-110 (G-A) 50.8 ile en sik gözlenen
mutasyon oldu. HbS alel sikliginin ise 6.0
oldugu gözlendi. IVSI.110 heterozigositesi en
sik gözlenen genotip olarak tespit edildi.
40
Türkiye genelinde 45 farkli mutasyon
bildirilirken, Antalya Hasta Tasiyici Norm
al Toplam Postnatal 213 521 83
817 (1998-2006) Prenatal 73 133 76
276 (2000-2007 Nisan) 24 farkli
mutasyon tespit edildi. Bu mutasyonlarin 6
tanesi anormal hemoglobinlerdir. Birlesik Arap
Emirliklerinde 50 farkli mutasyon, Israilde ise
31 farkli mutasyon bildirilmistir.
41
ANTALYADA TANIMLANAN YENI VE NADIR
MUTASYONLAR Hb Antalya (Cod 3-5) Hb G
Coushatta (Cod 22) Hb Knossos (Cod 27) Hb
Tyne (Cod 5) Hb D Hb S
42
TÜRKIYE VE ANTALYA Türkiye
Antalya Siklik 2.1 13.1 Tasiyici
1.300.000 200.000 Hasta 4.500 450 Akraba
evliligi 1/5(20) 35.17
43
Sonuç olarak Bizlere düsen görev Daha genis
arastirmalar planlamak Daha fazla egitim
vermek Daha çok tarama yapmak Daha düzenli
kayit tutmak Daha çok tasiyiciya
ulasmak Daha çok prenatal tani
yapmak Talasemiyi kontrol altina almaktir.
44
ANTALYA TALASEMI ÇALISMA GRUBU
Akdeniz Üniversitesi, Tip Fakültesi Tibbi
Biyoloji ve Genetik ABD
Akdeniz Üniversitesi, Tip Fakültesi Pediatrik
Hematoloji Bilim Dali ve Talasemi Tani, Tedavi ve
Arastirma Ünitesi,
Akdeniz Üniversitesi, Tip Fakültesi Kadin
Hastaliklari ve Dogum ABD ve Perinatoloji Bilim
Dali
Antalya Devlet Hastanesi Talasemi Ünitesi
45
TESEKKÜR Prof.Dr.Güven Lüleci Yrd.Doç.Dr.A.Esra
Manguoglu Ars.Gör.Dr.Ahter.D.Toraman
Sanlioglu Biyolog Fatma Kurt Biyolog Isil Hiz
46
(No Transcript)
47
BÜTÜN ÇABAMIZ
YENI TALASEMILI ÇOCUKLAR DOGMASIN
DIYE