De%20afsterving%20van%20micro-organismen

1
De afsterving van micro-organismen

• .

2
Studie-informatie

• In deze presentatie zie je een samenvatting over
  de afsterving bij micro-organismen als ze aan een
  schadelijke invloed worden blootgesteld. Het laat
  je in vogelvlucht zien wat er in de theorie
  staat. Alle oefeningen staan er niet in! Ook de
  bepalingen staan er slechts beknopt in, dus
  raadpleeg ook de website

3
Inleiding

• In veel gevallen is de aanwezigheid van
  micro-organismen ongewenst. Micro-organismen
  zijn de oorzaak van voedselinfectie of
  voedselvergiftiging. Ze veroorzaken bederf en dus
  verlies aan opbrengsten. In een ziekenhuis zijn
  steriele materialen nodig. Op het laboratorium
  zijn steriele voedingsmedia en glaswerk nodig om
  betrouwbare resultaten bij het onderzoek te
  krijgen.De bestrijding van micro-organismen is
  dus belangrijk. In dit hoofdstuk wordt dit
  besproken.

4
Sterilisatie

• is het zodanig behandelen van materiaal dat er na
  afloop geen levende (d.w.z tot groei in staat
  zijnde) micro-organismen meer aanwezig zijn.

5
Desinfectie

• is het zodanig behandelen van materiaal dat na
  afloop ervan het materiaal geen ziekte (infectie)
  veroorzaakt. In dit geval hoeven niet alle
  micro-organismen gedood worden maar worden ze wel
  zodanig in aantal verminderd dat het materiaal
  veilig gebruikt kan worden.
• Desinfectie vindt plaats als sterilisatie niet
  haalbaar is Het materiaal is niet bestand tegen
  sterilisatie.
• Ook kan sterilisatie niet zinvol zijn Het
  materiaal wordt direct na behandeling weer
  blootgesteld aan besmetting.

6
De afstervingscurve

• Wanneer een product een voor micro-organismen
  schadelijke behandeling ondergaat zullen de
  aanwezige micro-organismen afsterven.In welke
  mate dit gebeurt en met welke snelheid kan men
  aflezen in een afstervingscurve,hier onder staat
  er een a fgebeeld

7
De afstervingscurve, halflogaritmisch D
8
Waarom halflogaritmisch?

• Let op het betreft hier een half-logaritmische
  grafiek.
• Het aantal micro-organismen op de verticale as is
  logaritmisch weergegeven! We zien dat er op deze
  wijze een rechte lijn ontstaat, de waarden zijn
  nu goed af te lezen...

9
Wanneer is er sprake van zon afstervingslijn?

• Een vergelijkbare afsterving vindt behalve bij
  verhitting ook plaats bij andere schadelijke
  handelingen zoals
• Bestraling
• Desinfectie

10
Vul onderstaande tabel in (zie leeropdrachten)
door uit de grafiek de waarden af te lezen.
Leeropdracht
11
Opdracht
Vul de onderstaande tabel in
12
De decimale reductietijd is de tijd nodig om 90
van de bacteriesporen te laten afsterven.
Leeropdracht

• Wat is de decimale reductietijd ? , lees dit af
  uit de grafiek
• Wanneer zijn er 0 micro-organismen?.

13
De decimale reductietijd verschilt per behandeling

• Hoe schadelijker de behandeling, hoe korter de
  decimale reductietijd.
• Hoe hoger de temperatuur, hoe korter de decimale
  reductietijd.
• Hoe geconcentreerder het desinfectiemiddel hoe
  korter de decimale reductietijd
• Hoe hoger de dosis straling hoe korter de
  decimale reductietijd

14
Oefenopgave

• Op tijdstip 0 zijn er 106 micro-organismen per ml
  in een zojuist gemaakte (100ml) fles
  bouillonagar. D121 1 minuut.
• Hoelang moet een bij 121ºC verhit worden om 1
  spore op 1000 flessen (van 100 ml) over te houden
  ? Als er één spore per 1000 flessen aanwezig is
  kun je ook zeggen dat er een kans van 1 op 1000
  is dat je na sterilisatie een mislukte fles
  hebt.

15
Uitleg oefenopgaveInleiding

• Bij beide onderstaande methoden om de opgave te
  maken moet je erop letten dat de eenheden op elk
  tijdstip gelijk zijn. Als je begint met aantal
  micro-organismen per ml, dan moet je dat ook bij
  het eindresultaat van de verhitting doen. Dus
  niet 1 spore op 1000 flessen maar noteren hoeveel
  sporen er per ml zijn!

16
Methode 1

• Met een grafiek
• Maak een grafiek waarbij je log aan
  micro-organismen uitzet tegen de tijd. Je kunt
  een grafiek maken omdat je op één tijdstip het
  aantal micro-organismen weet en je weet de
  decimale reductietijd. Dus je kunt ook een tweede
  punt tekenen, bijvoorbeeld 1 minuut later zijn er
  105 sporen per ml. Door deze twee punten trek je
  een rechte lijn en klaar is je grafiek. In deze
  grafiek mag het aantal micro-organismen ook
  beneden de 0 dalen! Sterker nog! Het moet zelfs.
  Je start met 106 micro-organismen per ml en je
  gaat toe naar 1 spore op 100.000 ml. En dat is
  gelijk aan 10-5 spore per ml. In de grafiek zie
  je dan dat deze reductie van 106 maar 10-5 11
  minuten duurt.

17
Methode twee

• Kijk naar het aantal decimale reducties dat
  plaats vindt, dat is gelijk aan de afname van de
  exponent, deze daalt van 6 naar 5 11
  decimale reducties. Je weet dat 1 decimale
  reductie 1 minuut duurt, . 11 decimale reducties
  dus 11 minuten.

18
Factoren die het afstervingsproces beïnvloeden

• Het eindresultaat dat is het aantal levende
  micro-organismen na afloop van een schadelijke
  behandeling is zowel bij sterilisatie als
  desinfectie afhankelijk van een groot aantal
  omstandigheden.

19
De dosis

• Bijvoorbeeld de hoogte van de verhittingstemperatu
  ur bij sterilisatie en de concentratie van het
  desinfectiemiddel bij desinfectie of de
  hoeveelheid straling bij het doorstralen van
  materialen.
• Zo heeft het verhogen van de temperatuur een zeer
  groot effect.
• Men moet echter ook rekening houden met de
  hitteresistentie van het te steriliseren product.
  Zo is verhitting altijd schadelijk voor een
  voedingsmedium en zal men deze altijd zo kort en
  laag mogelijk verhitten

20
Beginconcentratie

• Het spreekt vanzelf dat bij een hogere
  beginconcentratie het eindresultaat van een
  verhitting slechter is dan bij een lagere
  concentratie. Hetzelfde geldt ook voor
  desinfectie en andere behandelingen die
  micro-organismen moeten laten afsterven

21
Het aantal micro-organismen aan het begin

• Het spreekt vanzelf dat bij een hogere
  beginconcentratie het eindresultaat van een
  verhitting )bij een bepaalde tijd) slechter is
  dan bij een lagere beginconcentratie. Hetzelfde
  geldt ook voor desinfectie en andere
  behandelingen die micro-organismen moeten laten
  afsterven.

22
De omgeving waarin de micro-organismen zich
bevinden

• Er zijn omstandigheden die het afstervingsproces
  gunstig beïnvloeden en andere omstandigheden die
  het afstervingsproces juist vertragen.

23
Omstandigheden die het afstervingsproces gunstig
beïnvloeden.

• Zo vindt de afsterving veel sneller plaats
  wanneer de verhitting onder vochtige
  omstandigheden plaatsvindt. (Weet je ook waarom?)
• Ook een lage pH of andere voor micro-organismen
  ongunstige omstandigheden maken de
  micro-organismen gevoeliger voor een schadelijke
  behandeling.

24
Omstandigheden die het afstervingsproces nadelig
beïnvloeden

• de aanwezigheid van vuil (organische materiaal)
  een storende factor bij het desinfectieproces.
  Het desinfectiemiddel reageert dan ook met dit
  vuil wat ten koste gaat van de reactie van het
  middel met de aanwezige micro-organismen. Ook zit
  het vuil vaak om de micro-organismen heen
  waardoor ze beschermd worden.
• Gevriesdroogde micro-organismen zijn zeer
  resistent tegen verhittingsprocessen.

25
Gevoeligheid van het micro-organisme

• Van groot belang is de resistentie van het
  ongevoeligste micro-organisme. Bij verhitting
  betreft het dan de sporevormers.

• Bij desinfectie is het soort micro-organisme ook
  van belang. Zo werken lang niet alle stoffen
  tegen sporenvormers en schimmels en gisten. Ook
  Pseudomonas is berucht om zijn resistentie tegen
  bactericide middelen.

26
Hitteresistente bij sporenvormers

• Binnen de groep van de sporevormers loop de
  hitteresistentie zeer sterk uiteen De
  hitteresistentie van de bacteriespore verschilt
  sterk per bacteriesoort. In de volgende tabel is
  dat te zien.

27
Hitteresistentie bij drie verschillende
sporenvormers
28
Verschillende sterilisatiemethoden.

• Op het laboratorium worden materialen en
  voedingsbodems vooral door verhitting
  gesteriliseerd.
• Hittegevoelige stoffen moeten (in oplossing) door
  filtratie van de aanwezige bacteriën worden
  ontdaan.

29
Er zijn twee apparaten waarin de sterilisatie
door verhitting plaatsvindtDe
droogsterilisator , een hete lucht ovenDe
autoclaaf, een grote snelkookpan waarin water
onder druk wordt verhit waardoor oververhitte
stoom ontstaat.
30
Toepassingen van de droogsterilisator

• De droogsterilisator, in feite een gewone hete
  lucht oven, wordt gebruikt voor hittebestendige
  materialen van glas en metaal. Ook watten en
  papier kunnen tegen de sterilisatietemperatuur.
• Waterige vloeistoffen kunnen hierin niet
  gesteriliseerd worden ze verdampen alleen maar.
• Olie wel, echter bij 121C in verband met de
  veiligheid.
• Andere materialen zoals kunststoffen zijn vaak
  niet bestand tegen de hoge sterilisatie
  temperatuur die nodig is in een droogsterilisator.

31
De autoclaaf

• Dit is een pan die na verwijdering van alle lucht
  luchtdicht wordt afgesloten. Vervolgens
  veroorzaakt de aanwezige stoom een overdruk.
  Hierdoor stijgt het kookpunt van water en kunnen
  temperaturen boven de 100ºC worden bereikt. Het
  gevolg is dat ook de sporen afsterven. Voorwaarde
  bij dit proces is dat er geen lucht meer in de
  afgesloten ruimte aanwezig is. Is deze wel
  aanwezig dan is er heerst er een lagere
  temperatuur dan bij 100 stoom het geval iszie
  volgende tabel.

32
De invloed van lucht in de autoclaaf op de
temperatuur
33
Conclusie

• Met lucht is er een veel slechter
  sterilisatieresultaat terwijl de drukmeter op de
  autoclaaf wel de juiste druk aangeeft!

34
Toepassingen van de autoclaaf

• Met de autoclaaf worden hittebestendige
  vloeistoffen en oplossingen gesteriliseerd.
  Voorwaarde is wel dat stoom erin kan doordringen,
  zo kan olie niet in de autoclaaf gesteriliseerd
  worden. Ook voorwerpen die niet tegen de hoge
  temperaturen van de droogsterilisator kunnen
  worden in de autoclaaf gesteriliseerd. Leeg
  glaswerk wordt voorzien van een druppeltje water
  ( om stoom in het glaswerk te laten ontstaan).

35
Het temperatuurverloop in de autoclaaf

• Kijken we naar de temperatuur in de autoclaaf
  nadat de verwarming aan is en de lucht verwijderd
  dan zien we het volgende

36
De eerste faseopwarmtijd omgeving
De opwarmtijd van de omgeving., dit is de tijd
nodig om de inhoud van de pan, dit is de omgeving
van het voorwerp, dus de stoom, op de gewenste
temperatuur brengen.De lengte ervan hangt af van
de (grootte van de) autoclaaf en de
verwarmingscapaciteit.
37
De tweede fase opwarmtijd voorwerp
.De opwarmtijd van het voorwerp, dit is de tijd
nodig om het voorwerp op de gewenste temperatuur
te brengen. Deze is afhankelijk van de lading in
de autoclaaf, de hoeveelheid materiaal, maar
vooral van het volume van het te steriliseren
medium. Hoe kleiner de porties hoe korter de
opwarmtijd. Het duurt korter om het centrum van.
een fles met 1 liter medium op temperatuur te
krijgen dan een buisje met 10 ml medium.
38
Fase drie minimale sterilisatietijd
.De werkelijke sterilisatietijd, dit is de tijd
die nodig is om het gewenste sterilisatieresultaat
te bereiken, het wordt ook wel de minimale
sterilisatietijd genoemd. Dit is de
sterilisatietijd die berekend wordt en nodig is
om een gewenst eindresultaat te bereiken.
39
Fase twee en drie samen werkelijke
sterilisatietijd
Fase 2 en 3 samen zijn de totale
sterilisatietijd, dus de tijd vanaf het moment
dat de pan op druk is tot het moment dat de
verwarming wordt uitgezet.
40
Fase vier afkoeltijd

• de afkoeltijd, wat opvalt is dat de omgeving
  sneller afkoelt als het voorwerp, zo kan het zijn
  dat de omgeving al kouder is dan 100C en het
  voorwerp nog warmer dan 100C.

41
Gevaren van de autoclaaf
Een apparaat waarin sprake is van overdruk kan
gevaarlijk zijn op school zijn er al
verschillende keren ontploffingen geweest door
onvoorzichtig handelen,

• Maak een autoclaaf (snelkookpan) pas open als de
  druk uit zich zelf gedaald is niet het ventiel
  verwijderen of op andere manieren stoom laten
  ontsnappen!
• Vervolgens voorzichtig openen en de flessen eruit
  nemen handschoenen aan en bril op!

42
Wat te doen met kokende vloeistoffen? Er zijn
twee oorzaken mogelijk

• Er heerst onderdruk in het flesje, oorzaak
  onderdruk in het flesje en daardoor een lager
  kookpunt. De onderdruk ontstaat doordat de lucht
  verwijderd is en de waterdamp gecondenseerd
• Oplossing bij de vlam het flesje openen

• De vloeistof is heter als 100ºC, oorzaak snellere
  afkoeling omgeving als het voorwerp.
• Oplossing rustig laten afkoelen. Niet op een
  koud oppervlak of onder koud water laten afkoelen

43
Hoe lang steriliseren?

• Dit hangt vooral af van het hoeveelheid vloeistof
  in de te steriliseren flessen/ buizen

44
De praktijk

• Steriliseer altijd het medium in zo klein
  mogelijke volumes
• het voorkomt onnodig lang verhitten wat de
  kwaliteit van het medium aantast.
• Je hoeft het na afloop niet te verdelen (op
  steriele wijze!) over de buizen (moet je dan ook
  apart steriliseren!)

45
Autoclaaf en droogsterilisatorde verschillen

• Hoewel beide apparaten door verhitting voorwerpen
  steriliseren zijn er toch verschillen. Het
  betreft
• De toepassingen. In de droogsterilisator worden
  geen waterige vloeistoffen zoals
  verdunningsvloeistoffen en media gesteriliseerd.
• De sterilisatietemperatuur, deze is veel hoger
  bij de droogsterilisator.
• De sterilisatietijd, deze is bij de
  droogsterilisator een stuk langer dan bij de
  autoclaaf.

46
Sterilisatietijden en temperaturen
47
Waarom moet droogsteriliseren zoveel langer en
heter?

• De oorzaak is de wijze van verhitten
• Bij de autoclaaf wordt stoom gebruikt. Deze
  verhitting in aanwezigheid van water is veel
  effectiever dan droog verhitten zijn doordat
  micro-organismen dan(biomoleculen zoals eiwitten
  en DNA) veelgevoeliger zijn De eiwitten kunnen
  met water gehydrolyseerd worden.
• Bij droge verhitting worden de eiwitten
  geoxydeerd wat meer energie kost. Daarnaast is de
  warmte-overdracht door middel van stoom een stuk
  sneller dan de warmte-overdracht door middel van
  lucht.

48
Hoe weet je zeker of iets steriel is?

• Controle van de producten, hierbij worden aantal
  gesteriliseerde producten op steriliteit
  onderzocht steriliteitcontroles .
• Men kan nooit alle producten onderzoeken, het kan
  dus zijn dat de onderzochte producten steriel
  zijn, maar een of meer van de niet onderzochte
  producten niet!

• Controle van het sterilisatieproces, hierbij
  wordt het proces gecontroleerd,
  sterilisatiecontrole, uitgaande van de gedachte
  dat als het proces goed verloopt de producten
  automatisch goed van kwaliteit zijn.

49
Steriliteitcontrole

• Bij de steriliteitscontrole worden een aantal
  producten onderzocht op de aanwezigheid van
  (overlevende) micro-organismen. Het principe is
  eenvoudig, men probeert elk (beschadigd)
  micro-organisme ,al is het er maar één, te laten
  groeien. De beoordeling van de proef is minder
  eenvoudig ,er moeten om juiste conclusies te
  kunnen trekken de nodige controles zijn
  meegenomen.

50
Uitvoering steriliteitscontrole

• Hiertoe brengt men het product in een rijk
  vloeibaar medium, zodat ook veeleisende
  micro-organismen kunnen groeien en beschadigde
  micro-organismen (wat na verhitting meestal het
  geval is) zich kunnen herstellen. Daarna vindt
  incubatie plaats, een aantal producten onder
  aërobe omstandigheden en een aantal producten
  onder anaërobe omstandigheden.
• Na de incubatie wordt op groei beoordeeld.

51
De beoordeling
Er zijn twee resultaten mogelijk groei of geen
groei

• Bij geen groei zijn er de volgende oorzaken
  mogelijk
• .Het product was steriel
• .Er waren wel micro-organismen maar deze konden
  niet groeien omdat
• .Het medium de micro-organismen niet in staat
  stelde te groeien.
• .Het product (aanwezig in het medium)
  groeiremmende eigenschappen bevatte

• Bij groei zijn er de volgende oorzaken mogelijk
• .Het product was niet steriel
• .Tijdens de bepaling is het product besmet
  doordat
• .De analist een besmetting heeft veroorzaakt
• .Het medium niet steriel was.

52
Hoe weet wat groei betekent? Welke controles heb
je nodig?

• .Het product was niet steriel
• Tijdens de bepaling is het product besmet doordat
• .De analist een besmetting heeft veroorzaakt
• .Het medium niet steriel was.

• om hiervan zeker te zijn moeten de
  besmettingmogelijkheden worden uitgesloten
• dit weet je nooit zeker, je kunt wel alles in
  het werk stellen om dit uit te sluiten, steriele
  werkkast, mondkapje voor, petje op, aparte
  labjas, door twee analisten laten inzetten,
  controles meenemen waarbij steriele producten
  worden ingezet.
• het is nooit 100 zeker dat een medium steriel
  is, vertonen echter de blancos (onbeënte media)
  en de onder a genoemde controles geen groei dan
  kan met dit wel uitsluiten.

53
Hoe weet je wat geen groei betekent?Welke
controles heb je nodig?

• om hiervan zeker te zijn moeten de hieronder
  genoemde twee mogelijkheden worden uitgesloten

• Het product was steriel
• Er waren wel micro-organismen maar deze konden
  niet groeien omdat

• Het medium de micro-organismen niet goed in staat
  stelde te groeien
• Het product (aanwezig in het medium)
  groeiremmende eigenschappen bevatte.

54
Controle op de geschiktheid van het medium

• Om de geschiktheid van het medium te controleren
  en na te gaan of ook veeleisende micro-organismen
  erop kunnen groeien moet men veeleisende stammen
  nemen en deze tijdens de proef als controles
  laten meelopen, groeien deze beestjes in het
  medium dan is het geschikt.

55
Controle op groeiremmende eigenschappen van het
product

• Om deze mogelijkheid te onderzoeken neemt men
  veeleisende en gevoelige micro-organismen en
  brengt deze (elk afzonderlijk) in het medium
  samen met het te onderzoeken product. Vindt er
  dan bij een of meer van de onderzochte
  micro-organismen geen groei plaats en bij de
  controle op de geschiktheid van het medium wel
  dan is remming door het product een mogelijke
  oorzaak ven het niet aantreffen van groei na
  incubatie

56
Onderzoek op groeiremmende producten

• Om dergelijke producten met een groeiremmende
  invloed toch op steriliteit te kunnen onderzoeken
  zijn er de volgende oplossingen mogelijk
• Relatief meer medium toevoegen waardoor het
  product als het ware verdund wordt, dit is niet
  altijd afdoende
• Het product filtreren, kan alleen bij vloeibare
  producten, het filter wordt daarna in medium
  gebracht en geïncubeerd. Is wel afdoende, maar
  kan alleen voor vloeibare producten. Wel geeft
  het gemanipuleer met een filter weer extra kans
  op besmetting en dus groei en dus een onterecht
  positief ( niet steriel, micro-organisme
  aanwezig) resultaat.
• Als de remstof bekend is, bijvoorbeeld bij het
  onderzoek van antibiotica, kan men een
  inactiverende stof Bij penicilline is dat
  bijvoorbeeld het enzym penicillinase. Dit werkt
  goed, men moet wel zeker weten met welke remstof
  men te maken heeft en of dit de enige remstof in
  het product is.

57
Sterilisatiecontrole

• Een alternatief voor de steriliteitscontrole is
  de sterilisatiecontrole. Hierbij wordt verloop
  van het sterilisatieproces gevolgd, het idee is
  dat als het proces goed verloopt de eindproducten
  ook goed zijn. Deze controle kan op verschillende
  manieren plaatsvinden

58
De verschillende procescontrole methoden

• Fysische methoden
• Temperatuurmetingen
• Drukmeting
• Chemische methoden.
• Hitte-indicatoren
• Biologische methoden
• Sporenstrips

59
Fysische methoden

• Temperatuurmetingen
• Tijdens het proces zodat men zeker weet dat het
  te steriliseren materiaal de juiste tijd de
  juiste temperatuur heeft gehad. Van belang is op
  de juiste plaats te meten, namelijk op de plaats
  waar de kans op een te lage temperatuur in de
  apparatuur het grootst is zoals op plaatsen waar
  moeilijk stoom kan komen of lucht kon ontsnappen
  (leeg droog glaswerk of opgevouwen textiel)

60
Fysische methoden

• Drukmeting
• De meeste autoclaven hebben een drukmeter, is de
  juiste druk bereikt dan gaat de (totale)
  sterilisatietijd in. Nadeel van het meten van de
  druk is dat de bijbehorende temperatuur
  (uitgaande van 100 stoom) niet bereikt wordt als
  de ontluchting niet volledig is. Plaatselijk is
  de temperatuur dan te laag geweest zonder dat dit
  gesignaleerd is.

61
Chemische methoden

• Van zeer veel stoffen is bekend dat ze na een
  bepaalde temperatuur tijd combinatie van kleur
  of consistentie veranderen.Zulke indicatoren kan
  men meenemen in het sterilisatieproces om dan na
  afloop kijken of de verwachte verandering heeft
  plaatsgevonden. Ook deze indicatoren moet men op
  de slechtst te ontluchten en/of te verhitten
  plaatsen in het apparaat plaatsen. Deze
  indicatoren zijn er in ampulvorm maar ook als
  tape. Deze tape wordt op de te steriliseren
  voorwerpen geplakt zodat na afloop
  gesteriliseerde voorwerpen te onderscheiden zijn
  van voorwerpen die nog gesteriliseerd moeten
  worden.

62
Biologische methoden

• Hierbij maakt men gebruik van zogenaamde
  sporenstrips. Dit zijn stripjes papier of
  aluminiumfolie waarop een standaard hoeveelheid
  (106) sporen van Bacillus stearothermophilus zijn
  aangebracht. Dit micro-organisme heeft de meest
  hitteresistente sporen die er bekend zijn. Worden
  deze gedood dan is het zeker dat ook alle andere
  sporen gedood zijn. Een tweede voordeel van
  Bacillus stearothermophilus is dat hij thermofiel
  is. Incubatie moet bij een hoge temperatuur
  plaatvinden, waardoor eventuele luchtinfecties
  ontstaan bij het manipuleren met de strip na het
  steriliseren geen kans krijgen om te groeien en
  onjuiste positieve uitslagen voorkomen worden .
  Een nevenvoordeel is dat de groeisnelheid zeer
  groot is, zodat de uitslag relatief snel binnen
  is Uiteraard haalt deze termijn het nooit bij de
  fysische en de chemische methoden, waarbij de
  uitslag onmiddellijk bekend is

63
Uitvoering sporenstripmethode

• Bij de controle brengt men een sporenstrip aan
  tijdens het te onderzoeken sterilisatieproces in
  de autoclaaf of droogsterilisator (weer op de
  moeilijkste plaatsen). Na afloop wordt de strip
  in een geschikte rijke voedingsbodem (met
  pH-indicator) gebracht en na incubatie op groei
  beoordeeld

64
Controle van het desinfectieproces

• Om na te gaan of een desinfectiemiddel zijn werk
  goed doet wordt het te onderzoeken desinfectans
  in contact gebracht met een bekende hoeveelheid
  van een bekend soort micro-organisme. Na de
  inwerkingstijd wordt bepaald of (eventueel
  hoeveel) overlevende micro-organismen zijn. Door
  het resultaat te vergelijken met een
  desinfectiemiddel waarvan de werking bekend is
  komt men tot een waarde-oordeel. Dankzij deze
  standaardisatie kan men verschillende
  desinfectiemiddelen onderling vergelijken.

65
Rideal Walkertest

• Bij deze test wordt onderzocht hoe goed een
  desinfectiemiddel werkt door van verschillende
  concentraties na te gaan welke concentratie nog
  juist in staat is om alle aanwezige bacteriën na
  een bepaalde inwerkingstijd te doden. Deze
  concentratie wordt de bacteriedodende
  grensconcentratie genoemd.
• Tegelijkertijd wordt op dezelfde manier ook een
  standaarddesinfectiemiddel nl fenol onderzocht.
  Ook dit levert een bacteriedodende
  grensconcentratie op.
• Beide waarden worden met elkaar vergeleken (door
  elkaar gedeeld), dit levert een getal op die een
  maat is voor de werkzaamheid van het
  desinfectiemiddel.
• Zie de website voor de uitvoering van de bepaling

66
De kwantitatieve suspensietest of 5-5-5-test

• Een tweede methode om een desinfectiemiddelte
  beoordelen op zijn werking is d.m.v. de
  5-5-5-test.
• De drie vijven staan voor
• Vijf verschillende micro-organismen
• Vijf minuten inwerkingstijd van het desinfectans
• Vijf decimale reducties

67
De 5 micro-organismen

• de test dient uitgevoerd worden met
  verschillende micro-organismen met uiteenlopende
  eigenschappen
• Een gram-positieve bacterie
• Een gram-negatieve bacterie
• Een sporenvormend micro-organisme
• Een gist of schimmel
• Pseudomonas, een bacterie die bekend staat om
  zijn resistentie tegen desinfectiemiddelen

68
5 minuten

• Bij deze proef wordt het te onderzoeken
  micro-organisme 5 minuten (elke soort
  afzonderlijk), in een bekende concentratie
  blootgesteld aan het desinfectiemiddel in de
  concentratie die door de fabrikant wordt
  aanbevolen. Om het desinfectans extra op de
  proef te stellen en de praktijkomstandigheden
  (een vuile omgeving, aanwezigheid van eiwitten)
  wordt ook een standaard hoeveelheid eiwit
  toegevoegd. Hierna wordt een bekend volume (1 ml)
  in een bekend volume inactiveringsvloeistof
  gebracht. Vervolgens wordt het kiemgetal bepaald.
  Als controle geschiedt deze gehele procedure op
  dezelfde manier maar dan zonder
  desinfectiemiddel. Zie voor de bepaling zelf de
  website Microbiologie bestrijding
  micro-organismen.

69
Vijf decimale reducties

• Het desinfectiemiddel moet tijdens de inwerking
  van het desinfectiemiddel 5 decimale reducties
  veroorzaken. Meer mag, minder beslist niet. Door
  de kiemgetallen van de gedesinfecteerde
  suspensie te vergelijken met de controlesuspensie
  kan men zien of dit streven gehaald wordt. Het
  aantal decimale reducties dat gerealiseerd wordt
  noemt men ook wel het microbicide effect, dit
  moet dus minstens 5 zijn.

70
(No Transcript)
71
(No Transcript)