CLAD Canine leukocyte adhesion deficiency

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CLADCanine leukocyte adhesion deficiency
Philippe LABARTHE
Paul KONINCKX
2ème doctorat médecine vétérinaire - 2003-2004
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Canine leukocyte adhesion deficiency colony for
investigation of novel hematopoietic
therapiesKate E.Creevy, Thomas R. Bauer
Jr., Laura M. Tuschong, Lisa J Embree, Lyn
Colenda, Kevin Cogan, Matthew F. Starost, Mark E.
Haskins, Dennis D. HicksteinVeterinary
Immunology and Immunopathology, Juil 2003
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CLAD

• Mutation dans la sous unité CD18 de lintégrine
  des leucocytes
• gt empêche lexpression du complexe CD11/CD18 à
  la surface membranaire du leucocyte
• gt non adhésion à lendothélium des vaisseaux
  sanguins et abscence de migration vers le site
  dinfection

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(No Transcript)
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• Setter irlandais
• Signes cliniques Apparition précoce après la
  naissance
• Omphalite
• Infection bactérienne sévère
• Fièvre
• Traitement Antibiothérapie insuffisante
• gt Mort ou euthanasie dans les premiers mois de
  vie

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CLAD gtlt LAD

• LAD déficience dadhésion leucocytaire chez
  l homme
• Thérapie unique transplantation de cellules
  souches hématopoiétiques
• Développement des protocoles de transplantation
  de moëlle depuis 30 ans chez le chien par
  extrapolation de la CLAD

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Développement de nouvelles thérapies
hématopoiètiques chez le chien Extrapolation
pour traiter la LAD
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MATERIEL ET METHODES

• Chiens vaccins,
• Pédigrée Setter Irlandais,
• Management de la portée F2 identification et
  type de statut CLAD à J7 - J10 après la naissance
• Cytomètrie de flux
• Séquençage du DNA pour la mutation CLAD
• Radiographie
• Test dhistocompatibilité
• Préparation dos pour analyse histologique

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(No Transcript)
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RESULTATS

• Pédigrée mutation récessive autosomale
• Signes cliniques
• Apparition précoce
• Leucocytose
• Taille, omphalite, fièvre, HOD (hypertrophic
  osteodystrophy)
• Infection bactérienne sévère
• Prophylaxie AB large spectre jusquà
  confirmation du statut CLAD.
  Si chiots atteints AB mais infections
  bactériennes fréquentes

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Size difference of a CLAD-affected pup
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Omphalitis and umbilical abscess in a 2-week old
pup
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Umbilical abscess in a 3-week-old pup
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Metaphysal swelling of the left carpal joint
typical in a CLAD-affected pup at 3 months of
age
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• HOD
• Apparition vers 2 mois dâge
• Macroscopiquement douleurs métaphysaires,
  sensibilité des tendons à la palpation, boiterie
  et tuméfactions
• Radiographie bande radio-opaque correspondant
  à un dépôt osseux au niveau du périoste avec
  inflammation
• Microscopiquement foyer de nécrose osseuse,
  perte dos trabéculaire, dépôt dos sans
  structure régulière

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Lateral radiograph of the normal distal radius
and ulna from a 4-month-old dog
Lateral radiographs of the distal radius and
ulna of a 4-month-old CLAD dog with HOD
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Bone histopathology from the CLAD dog With HOD
demonstrating loss of bone trabeculae with
disorganized new bone formation
Normal metaphysis with normal bone trabeculae
displaying organized linear areas of bone
formation
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• Cytomètrie de flux
• Analyse des neutrophiles
• Atteints de CLAD pas de fluorescence -gt pas de
  CD18
• Fluorescence hétérozygotes lt normaux
• Expression CD18 hétérozygotes lt normaux

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(No Transcript)
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• DNA transposition G-C
• Test dhistocomptabilité
• 2 microsatellites (VNTR) liés à un Ag du
  leucocyte
• Identification des donneurs potentiels de
  cellules souches hématopoiétiques

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(No Transcript)
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DISCUSSION

• Identification des hétérozygotes et des
  homozygotes par la cytométrie de flux et le
  séquençage du DNA
• gt Antibiothérpie appropriée dés les premiers
  jours de la vie
• Typage de lhistocompatibilité gt identification
  de donneurs potentiels

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CLAD modèle pour le développement dune
nouvelle thérapie hématopoiétique

• CLAD / LAD même phénotype clinique
• Chiens CLAD sont homozygotes récessifs pour la
  mutation
• Plusieurs paramètres quantitatifs distincts
• CLAD évaluation dune nouvelle thérapie
• transplantation de cellules souches
  hématopoiétiques
• thérapie génique sur cellules hématopoiétiques

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Thérapie génique

• Identification des homozygotes récessifs gt
  déficience en CD18
• Leucocytose due à lincapacité des leucocytes à
  marginer et à progresser vers le site dinfection
• Correction de la séquence DNA codant pour le CD18
  grâce aux marqeurs (gene targeting)
• Quantification des leucocytes par cytométrie de
  flux
• Espoir de thérapie génique applicable à lhomme

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Autres références bibliographiques

• Mixed chimeric hematopoietic stem cell transplant
  reverses the disease phenotype in canine
  leukocyte adhesion deficiency,
• Creevy KE, Bauer TR, Tuschong LM, Embree LJ,
  Silverstone AM, Bacher JD, Romines C, Garnier J,
  Thomas ML, Colenda L, Hickstein DD.
• Vet Immunol Immunopathol. 2003 Oct
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