Title: BARVEN
1BARVENÍ MIKROSKOPICKÝCH PREPARÁTU
2BARVENÍ je biochemická metoda, kterou se pridá
k substrátu specifická barvící látka (barvivo) a
slouží v biologii k prokázání výskytu
(kvalifikaci) nebo množství (kvantifikaci)
specifické látky ve zkoumané tkáni nebo v
pletivu, nebo k obarvení celých struktur a
objektu. Jednotlivé bunecné struktury nejsou v
mikroskopu pri pozorování bez predchozího
zbarvení témer rozlišitelné pro stejný nebo jen
málo odlišný lom svetla.
BARVIVA
Prirozená Umelá
Kyselá Zásaditá Neutrální
3Prirozená barviva
- hematoxylin - extrakt z kampeškového dubu
(Haematoxylon campechianum) - - bazické barvivo
4Prirozená barviva
- karmín - extrakt ze samicek cervce nopálového
(Coccus cacti) - - bazické barvivo
5Prirozená barviva
- orcein - extrakt z nekterých lišejníku
6Prirozená barviva
- šafrán - extrakt z blizen šafránu (Crocus
sativus) - - kyselé barvivo - na kolagen
7Prirozená barviva
- V minulosti bylo užíváno více prirozených barviv,
napr. - indigokarmín
- berberin - kyselé barvivo
- brazilin - bazické barvivo podobné hematoxylinu
8Umelá barviva
A/ XANTINOVÉ DERIVÁTY
- eosin (tetrabrom fluorescein)
- - barví acidofilní složky tkání
9Umelá barviva
- erytrosin (tetrajodfluorescein)
- - barví acidofilní složky tkání
10Umelá barviva
B/ TRIFENYLMETANOVÁ BARVIVA
- bazický fuchsin - základ i pro další barviva
jako jsou Schiffovo reagens, - rezorcifuchsin a
aldehydfuchsin
- anilínová modr, svetlá zelen a kyselý fuchsin -
kyselá barviva
11Umelá barviva
C/ THIAZINOVÁ BARVIVA
- thionin, toluidinová a methylenová modr -
bazická barviva
D/ AZOBARVIVA
- Janusova zelen - napr. pro supravitální barvení
mitochondrií - olejová cerven a sudanová cern - barviva na tuky
12- Kyselá, barvící plasmu (též plasmatická) -
eosin, svetlá zelen, oranž G, - kyselý fuchsin,
- Zásaditá, basická, barvící jádro (též jaderná
barviva) - toluidinová modr, - metylová zelen, basický fuchsin,
- hematoxylin
- Neutrální - napr. eosinát methylenové modri.
13TYPY BARVENÍ
A1/ progresivní - barvíme až je dosaženo žádaného
zbarvení, A2/ regresivní - napred tkán
prebarvíme, pak prebytecné barvivo
odstranujeme. B1/ sukcedánní - nekolik barviv po
sobe, B2/ simultánní - více barviv soucasne. - v
obou prípadech musí každé barvivo barvit jinou
cást tkáne C1/ substantivní - tkán barvíme prímo
barvivem, C2/ adjektivní - barvení
prostrednictvím moridla, které se váže prímo na
tkán Vitální barvení je zpusob, kdy je tkán
barvena za živa. Rozeznáváme barvení intravitální,
kdy barvíme prímo v tele zvírete a barvení
supravitální, kdy barvíme z tela vynatou tkán.
14Vitální barvení karmín - potravní
vakuoly Janusova zelen - mitochondrie Methylenová
modr - odliší živé bunky od mrtvých živé bunky
se neobarví, proto- že pumpují modr ven. Výber
barviva závisí na objektu barvení a strukturách,
které chceme barvit Motolice, tasemnice -
borax-karmín Prvoci - Giemsa-Romanowski,
hematoxylin Tkáne - hematoxylin-eosin Barvení
povrchového reliéfu - opálová modr, Burriho tuš.
15- ÚKOLY
- 1/ Pozorování a barvení živých prvoku z nálevu
- Postup
- na podložní sklo dejte kapku nálevu a prikryjte
(pro zvolnení rychlosti pohybu prvoku - poslouží vata)
- vedle krycího sklícka kápnete kapku inkoustu -
je videt cytostom a trichocysty - kapku tuše - je videt plnící se potravní
vakuola. - 2/ Barvení trepek aj. nálevníku po usmrcení
- na podložní sklo dejte po kapce trepek, usmrtte
kapkou Lugolova roztoku, který - prikápnete (3-6 minut), prikryjte krycím
sklíckem - vedle krycího sklícka z jedné strany kápnete
kapku modrého inkoustu, obarví se - jádro (makronukleus)
- z druhé strany prikápnete kapku cerveného
inkoustu, obarví se cytoplazma. - POZORUJTE A ZAKRESLETE!!!
16(No Transcript)
17(No Transcript)
18(No Transcript)
19(No Transcript)
20(No Transcript)