OPERON LAC

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OPERON LAC
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OPERON LAC
Operón Es una unidad de trasncripción genes
estructurales regulados por un promotor y un
operador . Ejemplo Los genes involucrados en
el uso de la Lactosa como fuente de carbono, se
encuentran agrupados y codifican para enzimas que
participan en la misma vía metabólica.
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OPERON LAC
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COMPOSICIÓN.

• a) Genes estructurales (en tándem).
• gen lac Z codifica para la expresión de la
  ß-galactosidasa
• el gen lac Y que codifica para la permeasa del
  galactósido.
• el gen lac A, codifica para la acetiltransferasa
  de tiogalactósido.
• Se transcriben desde un promotor común en un
  mRNA policistrónico, el cual es traducido para
  dar lugar a las tres enzimas.

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COMPOSICIÓN

• b) Promotor
• Sitio donde la polimerasa de RNA se une al DNA
  antes del inicio de la transcripción.

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COMPOSICIÓN.

• c) Operador
• Por lo general se localiza adyacente o traslapado
  con el promotor , sirve como el sitio de unión de
  una proteína, conocida como represor (ejemplo de
  proteína reguladora de genes).
• La proteína reguladora de genes (represor)
  reconoce una secuencia especifica dentro del DNA
  y se une a esta con alta afinidad.

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COMPOSICIÓN

• d) Gen Regulador.
• La expresión de los genes estructurales también
  esta controlada por un gen regulador específico.
• El gen regulador puede estar cerca o lejos de los
  genes que están siendo regulados. El gen
  regulador codifica para una proteína específica,
  un producto denominado REPRESOR.

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(No Transcript)
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• En este tipo de operador inducible como lac, la
  proteína represora sólo puede unirse al DNA en
  ausencia de lactosa, que funciona como un
  INDUCTOR.

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(No Transcript)
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CONTROL POSITIVO POR cAMP.

• La concentración de cAMP en las células se
  relaciona con la presencia de glucosa en el
  medio a mayor concentración de glucosa, menor
  concentración de cAMP.
• El cAMP actúa en las células procariotas al
  unirse a una proteína, en este caso la proteína
  receptora de cAMP (CAP). Aunque CAP es incapaz de
  unirse al DNA, el complejo cAMP-CAP reconoce y se
  une a un sitio especifico de la región de control
  de LAC, aumentando la afinidad de la región
  promotora por la RNA polimerasa, lo que estimula
  la transcripción del Operón.
• La presencia del complejo cAMP-CAP es necesaria
  para la transcripción del Operón, aun cuando la
  lactosa esta presente y el represor es inactivo.

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(No Transcript)
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(No Transcript)
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• ß-Galactosidasa Lac Z
• Represor transcripcional del operón Lac, Lac I
• Lactosa permeasa Lac Y
• Activador transcripcional del operón Mph
• 9 . Galactosidasa -O-Acetiltransferasa Lac A

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E. coli en medio mínimo
Medio mínimo
A Glu 2
B Lac 2
C Glu Lac 2
D Glu 2
E Glu Lac 2
15 min
½ tiempo Lac 2
7.5 min
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Centrifugar a 10,000 rpm, decantar
sndnt Resuspender bacterias en 250 µL de
amortiguador Z Añadir 25 µL de CHCl3 12.5 µL
SDS 0.1 Añadir 50 µL de ONPG, Incubar 2 min.
TA Añadir 125 µL Na2CO3 1 M Observar color