Mutace genu pro Connexin 26 jako v

1
Mutace genu pro Connexin 26 jako významná prícina
nedoslýchavosti

• Petr Lesný1, Pavel Seeman2, Daniel Groh1

1ORL klinika UK 2. LF a FN MotolSubkatedra
detské ORL IPVZPrednosta doc. MUDr. Zdenek
Kabelka 2Klinika detské neurologie DNA laborator
UK 2. LF a FN Motol
2
Obsah

• Prelingvální poruchy sluchu
• Connexin 26
• Typická anamnéza a vyšetrení
• Naše výsledky

3
Poruchy sluchu

• Nejcastejší a nejzávažnejší (WHO) smyslová vada u
  lidí
• Prelingvální, perilingvální a postlingvální
• Prelingvální hluchota 11000 prípadu
• Více než 50 na genetickém základu(napr. geny
  POU3F4, myosin 7A, otoferlin, pedrin, connexin 31)

4
Prelingvální poruchy sluchu
Vrozené (60)
Získané (40)
Spojené s urcitým syndromem (30)
Nesyndromové (70)
Autozomálne recesivní(80-85)
Autozomálne dominantní(15)
X-vázané amitochondriální(lt5)
(dnes již gt30 genu)
Mutace genu GJB2 kódujícího connexin 26 (80)
5
Connexin 26 (Cx26)

• Connexiny
• Membránové proteiny
• Soucásti gap-junction (je tvorena 6 molekulami
  connexinu)
• Umožnují pohyb malých molekul a iontu mezi
  bunkami
• Connexin 26 tkánove specifický (spojuje
  navzájem podpurné bb. v hlemýždi)

6
Connexin 26 (Cx26)
Na-specifické iontove selektivní kanály
Iontove selektivní kanály tvorené Connexinem 26
Umožnuje recirkulaci iontu K zpet do endolymfy
v prubehu zvuku ? repolarizaci bunek
7
Mutace genu pro Cx26

• Gen GJB2 na chromosomu 13q11
• Jsou zodpovedné za 60-80 AR vrozených
  nesyndromických ztrát sluchu? za 20-30
  prelingválních ztrát sluchu
• Cetnost heterozygotu (nosicství) v Evrope je 131
  (stejne jako napríklad CF)
• Není závislost mezi typem mutace Cx26 a
  závažností ztráty sluchu
• Prokázán founder efekt (existence hypotetického
  spolecného predka) Van Laer, 2001

http//www.iro.es/cx26deaf.html
8
Heterozygoti pro Connexin 26/30

• Mutace v genu GJB6 kódujícím Connexin 30 je druhá
  nejcastejší genetická prícina vrozené
  prelingvální nesyndromické poruchy sluchu
• Heterozygoti pro Connexin 26 (odpovídající
  diagnostickým kritériím) ? mohou mít mutaci
  Connexinu 30

del Castillo, 2002
9
Genetické vyšetrení mutací Cx26

• Ve svete dnes již bežné
• Malý gen umožnuje rutinní genetické vyšetrení
• Nekteré mutace jsou velmi casté (mutace 35delG je
  nacházena v Evrope až v 80 prípadu)
• Genetické poradenství, prenatální diagnostika,
  prognóza pro CI?

10
Typická anamnéza

• RA autozomálne recesivní typ vady obe pohlaví
  jsou postižena stejne casto rodice mívají sluch
  normální sourozenci mohou být postižení (25)

11
Typická anamnéza

• OA Vyloucení získaných vad
• kongenitální infekce (rubeola, VZV, CMV, EBV,
  toxoplasmóza, lues apod.)
• asfyxie u porodu, porodního traumatu,
  prolongované UPV, Rh inkompatibilita apod.
• kraniofaciální malformace
• ototoxické léky
• vady spojené s genetickými syndromy
• u nedonošencu pod 1500g je casté krvácení do
  labyrintu

12
Typický nález

• Vyšetrení svedcí pro bilaterální percepcní ztrátu
  sluchuotomikroskopie vylouceny anomálie
  zevního zvukovodutympanometrie krivka AOAE
  nevýbavnéaudiometrie krivka plochá nebo
  klesající (nejvetší ztráta je na 4000-8000 Hz)

13
Diagnostika

• ORL a pediatrické vyšetrení
• zarazující kritéria
• vylucující kritéria
• Genetická konzultace se sestavením rodokmenu,
  informovaný souhlas
• Odber krve ci použití krevních skvrn Guthrie
  karet
• DNA vyšetrení nejcastejších mutací 35delG
• Sekvenování genu pro nalezení méne castých mutací
• Genetická konzultace - dovyšetrení rodicu,
  sdelení výsledku

14
Záver

1. Pomer mezi vrozenými a získanými prelingválními
   ztrátami sluchu stoupá
2. 20-30 prelingválních ztrát sluchu je zpusobeno
   mutací genu pro Connexin 26
3. Vyšetrení mutací Cx26 v CR?
4. Umožnení genetického poradenství i prenatální
   diagnostiky

15
První výsledek v CR (2001) prenatální
diagnostika v rodine pacienta s kochleárním
implantátem
CI
Pavel.Seeman_at_lfmotol.cuni.cz
16
Molekulárne genetické vyšetrení genu Cx26

• Potvrzení ci vyloucení hlavní mutace 35delG
• fragment analýza - prítomnost fragmentu o 1 bp
  kratšího (vetšina postižených jsou homozygoti)
  nebo
• prímé sekvenování genu
• V prípade nehomozygota pro 35delG
• dovyšetrení všech dalších mutací pomocí
  sekvenování celého kódujícího úseku ve 2 PCR
  fragmentech
• Vyšetrení rodicu a sourozencu pro zjištení puvodu
  mutace

Pavel.Seeman_at_lfmotol.cuni.cz
17
Kritický úsek sekvence genu Cx26
normální DNA sekvence - 6xG1G casto u pacientu
chybí
Pavel.Seeman_at_lfmotol.cuni.cz
18
První vyšetrení v CR a první potvrzený pacient
Matka
Neslyšící díte
Plod
Otec
Pavel.Seeman_at_lfmotol.cuni.cz
19
Zpráva

1. Neslyšící pacient je homozygotem pro nejbežnejší
   mutaci genu pro Cx26 35delG
2. Rodice jsou heterozygoti pro tuto mutaci, 25
   riziko postižení dalších potomku
3. Plod je zdravý homozygot - nemel by být postižen
   poruchou sluchu závislou na mutaci Cx26

Pavel.Seeman_at_lfmotol.cuni.cz
20
Druhý výsledek vyšetrení pacientu s kochleárními
implantáty a kongenitální etiologií poruchy
sluchu (2002)
Predpoklad castého výskytu mutace. Celkem
vyšetreno (II/2002) 29 pacientu.
bez mutace 13 pacientu
heterozygoti 2 pacienti
homozygoti pro Cx26 14 pacientu
21
Dekuji za pozornost