Conferenza di Denver

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Conferenza di Denver
Sc.Biosanitarie Genetica I
Universita di Bari
1-3 gruppo A
4-5 gruppo B
1966
X-6-12 gruppo C
13-15 gruppo D
16-18 gruppo E
19-20 gruppo F
Y-21-22 gruppo G
by GPNA
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Cariotipi a confronto
Sc.Biosanitarie Genetica I
Universita di Bari
1-3 gruppo A
4-5 gruppo B
X-6-12 gruppo C
13-15 gruppo D
16-18 gruppo E
19-20 gruppo F
Y-21-22 gruppo G
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Metodi colorazione differenziale
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• Colorano una regione specifica di alcuni o
• di tutti i cromosomi

C-bande tutti i centromeri e le regioni
eterocromatiche variabili dei cromosomi 1,9,16,Y

• Creano unalternanza di bande chiare e
• scure lungo lasse del cromosoma
• specifica per ogni coppia di omologhi.

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QM-banding pattern
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utilizzando la mostarda di quinacrina......
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DAPI e QM
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G-bande
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R-bande
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Diagramma
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Terminologia
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• Questo modo di scrivere ci da due informazioni
• numero totale dei cromosomi (46)
• sesso dellorganismo

47,XY,21 Maschio con 47 cromosomi (invece di
46) ed un cromosoma 21 in piu (sindrome di Down)
46,XX,del(14)(q23) deldelezione
46,XY,dup(14)(q22q25) dup duplicazione
46,XX,r(7)(p22q36) rring (cromosoma ad anello)
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FISH
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FISH microscopio a fluorescenza
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• fotografia

CCD camera
filtro di emissione
Lampada a vapori di mercurio

specchio dicroico
filtro di eccitazione
Elaborazione al computer
obiettivo/ condensatore
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FISH metafase in DAPI
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Cromosomi 1. denaturati 2. colorati con DAPI
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FISH segnali
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FISH merge
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Analisi del cariotipo
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1) Allestimento della coltura
2) Preparazione dei vetrini
3) Colorazione del preparato con colorazioni
differenziali di routine
4) Osservazione al microscopio, selezione delle
metafasi e acquisizione delle immagini
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Allestimento del preparato
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Analisi del cariotipo
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1) Allestimento della coltura
2) Preparazione dei vetrini
3) Colorazione del preparato con colorazioni
differenziali di routine
4) Osservazione al microscopio, selezione delle
metafasi e acquisizione delle immagini
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Colorazione QM
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3) Colorazione del preparato con colorazioni
differenziali di routine

• Fluorocromi QM,
• DAPI. Necessario un microscopio
• a flurescenza

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Colorazione Giemsa
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3) Colorazione del preparato con colorazioni
differenziali di routine
G-banding con Giemsa dopo trattamento con
tripsina
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Analisi del cariotipo
Sc.Biosanitarie Genetica I
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1) Allestimento della coltura
2) Preparazione dei vetrini
3) Colorazione del preparato con colorazioni
differenziali di routine
4) Osservazione al microscopio, selezione delle
metafasi e acquisizione delle immagini
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Selezione delle metafasi
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• Ottima
• ma..

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Selezione delle metafasi
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• Puo
• essere
• anche cosi..

• Cromosomi non ben riconoscibili, difficili anche
  da
• contare.
• Scartare! (potendo)

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Selezione delle metafasi
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• .. O cosi

• Troppo contratti
• pero si puo usare
• per contarli.
• Scartare! (potendo)

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Selezione delle metafasi
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• Sufficiente

• Si possono contare
• Puo essere utile per
• analizzare i cromosomi
• non sovrapposti

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Selezione delle metafasi
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• Discreta

• Si possono
• contare, e anche
• se ci sono alcune
• sovrapposizioni,
• si possono
• analizzare

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Selezione delle metafasi
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• Buona

• Si possono
• contare, e anche
• se ci sono alcune
• sovrapposizioni,
• la morfologia dei
• cromosomi e
• buona

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Come si fa il cariotipo?
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1. SI CONTANO I CROMOSOMI IMPORTANTE PER
SOSPETTARE LA PRESENZA DI ALTERAZIONI NEL NUMERO
CROMOSOMICO
2. SI APPAIANO GLI OMOLOGHI PER SIMILARITA
3. SI METTONO IN ORDINE SECONDO LA CONVENZIONE
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Fare il cariotipo
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46
10
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Cariotipo ordinato
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CARIOTIPO IN QM (specifico il bandeggio)
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