TESTUL DIRECT CU ANTIGLOBULINA (TDA)

1
TESTUL DIRECT CU ANTIGLOBULINA (TDA)

• Efectuat ca parte a identificarii anticorpilor
• Jean Purcelli, MT(ASCP)SBB
• Centrele de Sânge ale Pacificului

2

• 
  
  Detecteaza coagularea in vivo a eritrocitelor sau
  componentelor complementului, sau a ambelor, cu
  IgG .
• Eritrocitele colectate în EDTA sunt cea mai
  potrivita sursa de celule pentru a fi folosite la
  TAD.
• Eritrocitele din mostrele coagulate pot arata
  rezultate fals pozitive, la utilizarea AHG
  polispecific sau monospecificanti-C3d AHG .

3

• TDA poate fi solicitat de catre medicul de
  familie pentru a investiga
• Anemia hemolitica autoimuna
• Hemoliza cauzata de medicamente
• Boala hemolitica a fatului sau nou-
  nascutului
• (BHFN)
• Reac?ii alo-imune în urma transfuziei
  recente de eritrocite.

4

• TDA este, de asemenea, inclus în investigarea de
  baza a anticorpilor
• TDA este similar testului de auto control, însa
  aceste teste nu pot sa se substituie reciproc.

5

• TDA poate fi pozitiv în cazul
• Unei reac?ii la transfuzie,imediate sau
  întârziate.
• Eritrocitele de la donator sunt coagulate
  de catre plasma pacientului.
• Bolilor auto-imune anemii hemolitice autoimune
  la rece ?i la cald.

6
TDA pozitiv

• Boala hemolitica a fatului ?i nou-nascutului
• (BHFN)
• Celulele din cord ?i eritrocitele din sânge sunt
  coagulate de catre anticorpii mamei.
• Eritrocitele fatului pot fi coagulate de catre
  anticorpii din orice sistem semnificativ clinic
  matern, inclusiv ?i de cei din sistemul ABO.

7
TDA pozitiv BHFN

• Anticorpii ABO sunt de regula IgM ?i nu
  traverseaza placenta.
• Totu?i, persoanele cu grupa O au deseori ?i o
  componenta IgG de anti-A ?i B.
• BHN cauzata de anticorpii sistemului ABO, de
  regula, nu este grava, ?i nivele înalte ale
  bilirubinei sunt controlate de catre remedii cu
  bilirubina.

8
TDA pozitiv

• Boli colagen-vasculare SLE, RA
• Anemii hemolitice induse medicamentos (alpha
  methyldopa, phenacetin, penicillin, quinine,
  orice cephalosporin, procainamide).
• Hemoliza Paroxistica la Rece (HPR)

9
TDA pozitiv

• Tratament cu IVIG poate con?ine anticorpi ABO
  sau anti-D sau alte specificita?i.
• Transplant de maduva osoasa sau de organe
  limfocitele de la donator pot produce anticorpi
  ABO, sau de alt tip, la celulele recipientului.

10
TDA pozitiv

• Tratamentul pacien?ilor cu transplant cu
  globulina anti-limfocite (GAL) sau globulina
  anti-timocite (GAT).
• Tratamentul cu RHIG IV.
• Adsorb?ie nespecifica a proteinelor.

11

• În laborator, TDA este inclus ca parte componenta
  a investigarii anticorpilor.
• Eritrocitele spalate sunt testate direct cu
  reagen?i AHG.
• Se utilizeaza reagen?i mono-specifici ?i
  poli-specifici.

12

• AHG poli-specific con?ine componente anti-IgG ?i
  anti-complement.
• Anti-IgG mono-specific con?ine doar anti-IgG.
• Anti-complementul mono-specific con?ine anti-C3d
  ?i, de regula, anti-C3b.

13

• AHG poli-specific este folosit la testul de
  detectare (screening).
• Daca testul este negativ, TDA este raportat ca
  fiind ?i el negativ.
• Daca testul este pozitiv, se repeta testarea cu
  reagen?i mono-specifici.

14

• Toate TDA presupun ?i o eprubeta cu solu?ie
  fiziologica pentru efectuarea controlului.
• Trebuie sa fie inclusa ?i examinarea
  microscopica.
• Aglutinarea mixta poate fi observata la
  pacien?ii transfuza?i recent.

15

• Etapele dupa examinarea prin metoda CI
  (centrifugare imediata)
• Se înregistreaza rezultatele.
• Daca eprubeta cu IgG este non-reactiva, se
  adauga celule de control (Checkcell).
• Daca nu este reac?ie, eprubeta poli-specifica ?i
  eprubeta cu complement sunt plasate la
  temperatura camerei pentru 5-10 minute, se
  centrifugheaza ?i se examineaza microscopic din
  nou, se înregistreaza rezultatul ?i se adauga
  celule de control.

16

• Celulele coagulate anti-IgG nu vor reac?iona cu
  eprubetele care con?in anti-complement.
• Se va folosi o celula de control
  anti-complement.

17
ELU?IA ?i TESTAREA cu ELUANT

• La identificarea anticorpilor, se va face o
  elu?ie, DOAR în cazul în care pacientul a fost
  recent transfuzat.
• Fiecare laborator de referin?a trebuie sa-?i
  stabileasca definirea proprie a termenului
  recent. În SUA, termenul folosit este de la 2
  saptamâni la 3 luni.

18

• Se prepara o elu?ie ?i se testeaza, pentru a
  detecta anticorpul nou-format, care nu a fost
  detectat de ser.
• Momentele de vârf în producerea anticorpilor au
  loc la 10-18 zile dupa expunerea la antigena
  straina.

19

• Elu?ia este testata cu IAT ?i, de regula, se
  folose?te acela?i panel de celule care a fost
  folosit la testarea serului. De obicei, se
  folose?te ?i o solu?ie catalizator.
• Celulele A1 ?i B trebuie sa fie de asemenea
  testate, daca exista incompatibilitate ABO între
  mama ?i prunc.
• La fel ?i în cazul adul?ilor, daca persoana a
  fost transfuzata recent cu trombocite
  incompatibile ABO sau plasma.

20

• Nu se va face elu?ia în cazul eritrocitelor
  coagulate doar de complement.
• Dupa ultima spalare, de regula, solu?ia este
  pastrata ?i testata pentru a identifica
  disocia?ii neobi?nuite a anticorpilor de la
  eritrocite.
• Dupa ultima spalare, eritrocitele sunt folosite
  pentru detectarea anticorpilor cu solu?ie
  catalizator ?i IAT.

21

• Dupa ultima spalare eritrocitele trebuie sa fie
  negative. În caz contrar acestea vor fi spalate
  adi?ional.
• O ultima spalare pozitiva va face ca
  rezultatele testului cu elu?ie sa fie incorecte.
• Se recomanda ca pentru spalarea eritrocitelor sa
  se foloseasca LISS sau solu?ie fiziologica,
  pastrata la 4 C .

22

• Raportul final trebuie sa con?ina comentarii
• Anti-Jka a fost identificat în eluant, fapt care
  poate indica ca pacientul are o reac?ie la
  transfuzie.
• Elu?ia a fost non-reactiva.
• Elu?ia a reac?ionat cu toate eritrocitele fara
  specificitate aparenta.

23

• Daca DAT, dar ELUA?IE NEGATIVA
• Poate însemna un TDA indus medicamentos
• SAU
• Absorb?ie nespecifica a proteinelor

24

• Va rog sa face?i referin?a la Proceduri
  Selectate pentru Trimiterea Rapida".
• Vom utiliza procedura Elukit II .