Presentazione di PowerPoint

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Anno accademico 2002-2003 Canale A Prof. Malavasi

• Lezione 4
• 1) Come sequenziare un gene
• 2) Tecniche per lanalisi dellespressione di un
  gene e della sua regolazione
• 3) Tecniche per lanalisi della funzione del
  prodotto del gene

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Filmato sequenziamento
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DNA detective
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La Polymerase chain reaction (PCR)
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Filmato PCR
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Come visualizzare lespressione di un gene in
una cellula o in un tessuto?

1. Northern blot
2. Tissue in situ hybridization

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Northern blot una tecnica impiegata per
identificare e localizzare sequenze di RNA
messaggero che sono complementari a una sonda di
DNA
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Come visualizzare lespressione del prodotto di
un gene in una cellula o in un tessuto?
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Anticorpi monoclonali
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Immunofluorescenza
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Immunoistochimica
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Impiego delle capacità agonistiche mediate da
ligandi per definire funzioni 1) Legame
dellAcMo al bersaglio ? blocco funzionale 2)
Legame dellAcMo al bersaglio ? attivazione
funzionale
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• Tecniche per studiare la funzione del prodotto di
  un gene
• In vitro trasfezione
• In vivo modelli animali (topi knockout)

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• Per trasfezione si intende lingresso,
  lincorporazione e lespressione di DNA
  ricombinante da parte di cellule eucariote
• Può essere
• Transitoria
• - shock osmotico
• 2) Stabile
• - elettroporazione
• - microiniezione
• Per infezione si intende lingresso,
  lincorporazione e lespressione di DNA
  ricombinante da parte di cellule eucariote
  infettate da un virus

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