http://www.microcsalud.us.es/

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INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA CLÍNICA
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PROCESO DE APRENDIZAJE

• Conocimientos---------SABER.
• Microbiología Medica.
• Microorganismos productores
• Hábitos---------------- SABER HACER.
• Microbiología Clínica. Pacientes con síndromes
  de etiologia microbiana
• Actitudes--------------- SABER SER MEDICO.

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MICROBIOLOGÍA CLÍNICA

• Diagnósticos etiológicos preliminares.
• Utilización racional de las técnicas
  diagnósticas.
• Correcta obtención de muestras.
• Fundamentos de técnicas y métodos diagnósticos.
• Evaluación correcta de los resultados.

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FASES EN EL DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO

• Clasificación inicial. Tiene una infección ?
• Clasificación sindrómica.
• Que muestras tomar ?
• Cuando tomarlas ?
• Como tomarlas ?
• Diagnósticos simultáneos o sucesivos

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FASES DEL DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO

• Fase pre analítica
• Proveer información sobre recogida/transporte y
  conservación de las muestras.
• Interpretación de los resultados.
• Utilización de la prueba.
• Fase analítica
• Producir resultados de calidad.
• Fase post analítica
• Revisar exactitud del resultado.
• Evaluar la relevancia clínica.

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RELEVANCIA CLÍNICA

• Modificación de nuestra actitud con el paciente
• Gravedad del proceso
• Otras actividades derivadas
• Declaración obligatoria
• Aislamiento del paciente
• Indicación de profilaxis

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MISIONES DE UN SERVICIO DE MICROBIOLOGÍA

• Información necesaria para tomar una decisión
  clínica y adopción de medidas preventivas.
• Normas de obtención de muestras para un correcto
  diagnóstico microbiológico.
• Identificación de microorganismos.
• Estudio de sensibilidad a antimicrobianos.
• Facilitar recepción de muestras.
• Envío rápido de resultados.
• Valoración de las técnicas diagnósticas.
• Puesta al día de los conocimientos.

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NO PIDAS NADA QUE SI ES POSITIVO NO SEPAS QUÉ
HACER
UTILIZACIÓN DE UNA TÉCNICA DIAGNÓSTICA
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UTILIZACIÓN DE UNA TÉCNICA DIAGNÓSTICA

• Valoración previa de que un paciente presente o
  no la enfermedad.
• Planteamiento inicial antes de solicitar una
  prueba diagnóstica de cual va a ser nuestra
  actitud y decisión después del resultado de la
  misma.
• Conocimiento de la eficacia de una prueba a
  utilizar.

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PARÁMETROS DE UNA TÉCNICA DIAGNÓSTICA

• Sensibilidad
• Especificidad
• V.P.Positivo
• V.P.Negativo
• Eficiencia
• Relevancia clínica

• Verdadero positivo
• Verdadero negativo
• Falso positivo
• Falso negativo

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SENSIBILIDAD (S)
Verdadero positivo (VP)
X 100
S
(VP) Falso negativo (FN)
ESPECIFICIDAD (E)
Verdadero negativo (VN)
E
X 100
(VN) Falso positivo (FP)
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EFICIENCIA
VP VN
X 100
Total
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VALOR PREDICTIVO POSITIVO (VPP)
(VP)
X 100
VPP
(VP) (FP)
VALOR PREDICTIVO NEGATIVO (VPN)
(VN)
VPN
X 100
(VN) (FN)
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ERRORES DIAGNÓSTICOS

• Falso Positivo Diagnóstico microbiológico de un
  paciente que no padece la enfermedad infecciosa.
  I.T.U.
• Falso Negativo Descartar una patología
  infecciosa en un paciente infectado. Meningitis
  meningocócica.

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VALOR PREDICTIVO DE UNA PRUEBA CON UN 95 DE S. Y
UN 95 DE E. VARIACIONES EN FUNCIÓN DE LA
PREVALENCIA DE LA ENFERMEDAD

• Prev. Enfermedad ()

• Valor Predictivo ()

• 1
• 2
• 5
• 10
• 15
• 20
• 25
• 50

• 161
• 279
• 50
• 679
• 77
• 826
• 864
• 95

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NORMAS GENERALES DE TOMA DE MUESTRAS CLÍNICAS
PARA EL DIAGNÓSTICO DE LAS EE.II.

• La muestra debe ser representativa del cuadro
  clínico.
• Debe obtenerse antes de la instauración del
  tratamiento antimicrobiano.
• En determinados procesos infecciosos (p. ej.
  septicemia) el momento de la obtención puede ser
  importante.
• Debe transportarse rápida y adecuadamente al
  laboratorio.
• Debe rotularse correctamente y venir acompañada
  de una orientación o juicio clínico que permita
  realizar las técnicas adecuadas al microorganismo
  sospechado.

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MUESTRAS PARA EL DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO TIPOS

• Muestras de obtención directa de localizaciones
  estériles. Alta rentabilidad.
• Muestras de obtención indirecta de localizaciones
  estériles. Rentabilidad dependiente de la flora
  saprofita.
• Muestras obtenidas de localizaciones con flora
  microbiana.
• Muestras para el diagnóstico virológico. Alta
  rentabilidad , si no es flora viral habitual.

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PRINCIPALES MUESTRAS CLÍNICAS PARA AISLAMIENTO DE
VIRUS
Cuadro clínico Exudado faríngeo LCR Orina Heces Vesículas Otros
Meningitis y Encefalitis V. de la parotiditis Enterovirus Herpes simple Respiratorios Gripe y V. parainfluenzae Adenovirus () () (/-)/() () () () () (/-) (-) (-) () (-) (-) (-) (-) (-) () (-) (-) () (-) (-) () (-) (-) Biopsia ()
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MÉTODOS DIAGNÓSTICOS

• Métodos directos
• Visualización del microorganismo.
• Aislamiento del microorganismo.
• Detección de antígenos.
• Detección de metabolitos, componentes y ácidos
  nucleicos.
• Métodos indirectos
• Detección de anticuerpos Diag. Serológico.
• Detección Respuesta Inmune Celular.

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PRINCIPALES TÉCNICAS MICROSCÓPICAS USADAS PARA LA
VISUALIZACIÓN DE MICROORGANISMOS EN MUESTRAS
CLÍNICAS
Técnica Utilidad
Microscopía óptica Fresco Microscopía óptica Tinción Microscopía campo oscuro Microscopía contraste de fases Microscopía luz ultravioleta Microscopía electrónica Hongos, parásitos y virus (efecto citopático) Bacterias, hongos y parásitos. Treponemas (chancro sifilítico) Hongos y parásitos (poca utilidad diagnóstica) Inmunofluorescencia(bacterias, hongos y parásitos. Virus (poca utilidad diagnóstica)
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VISUALIZACIÓN DEL MICROORGANISMO

• Microscopía diferentes tipos
• Examen en fresco
• Tinciones
• Tinción de Gram
• Tinción de Ziehl-Neelsen

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TINCIÓN DE GRAM APLICACIONES

• LCR y otros fluidos estériles
• Esputo
• Exudado uretral
• Exudado vaginal
• Exudados inflamatorios
• Orina

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INFORMACIÓN QUE APORTA UNA TINCIÓN DE GRAM EN
MUESTRAS CLÍNICAS (EXUDADOS INFLAMATORIOS Y
FLUIDOS ESTÉRILES)

• Permite evaluar la calidad de la muestra.
  Presencia de
• Células inflamatorias ? muestra adecuada
• Células epiteliales ? posible contaminación
• Permite visualizar la morfología, su disposición
  y localización intra o extracelular de las
  bacerias
• Permite diferenciar bacterias Gram y Gram
• Permite detectar la presencia de flora
  contaminante
• Permite cuantificar el número de bacterias.

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AISLAMIENTO DEL MICRORGANISMO

• Cultivo en medios artificiales
• Nutritivos
• Selectivos
• Diferenciales
• Cultivos celulares
• C. de órgano C. primarios
• C. Secundarios Línea celular
• Inoculación animal

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CARACTERÍSTICAS UTILIZADAS PARA LA IDENTIFICACIÓN
DE BACTERIAS

• Crecimiento en distintos medios de cultivo
• Características bioquímicas
• Producción de toxinas
• Estructura antigénica
• Estructura genómica

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DETECCIÓN DIRECTA DE ANTÍGENOS MEDIANTE TÉCNICAS
DE AGLUTINACIÓN

• Antígenos bacterianos
• H. influenzae
• S. pneumoniae
• N. meningitidis
• Antígenos fúngicos
• C. neoformans
• Antígenos víricos
• Rotavirus
• Adenovirus

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DETECCIÓN DIRECTA DE ANTÍGENOS MEDIANTE TÉCNICAS
DE ELISA

• Antígenos bacterianos
• S. pyogenes
• L. pneumophila
• C. trachomatis
• C. difficile (toxina)
• Antígenos fúngicos
• C. neoformans
• A. fumigatus

• Antígenos víricos
• Adenovirus
• Herpesvirus
• V. respiratorio sincitial
• Rotavirus
• Antígenos parasitarios
• G. lamblia
• C. parvum
• E. histolytica

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VENTAJAS DE LAS TÉCNICAS DE AMPLIFICACIÓN

• Sensibilidad extrema (detectan hasta 1-10
  microorganismos)
• Alta especificidad (diseño de cebadores en
  función de secuencias específicas del
  microorganismo)
• Rapidez de realización (máximo 24 horas)
• Detección de microorganismos viables y no viables
• Automatizables

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INCONVENIENTES DE LAS TÉCNICAS DE AMPLIFICACIÓN

• Posibles falsos positivos
• Acondicionamiento especial del laboratorio
• Alto nivel de entrenamiento del personal
• Elevado coste inicial

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DIAGNÓSTICO MEDIANTE BIOCHIPS-MICROARRAYS

• Se fundamenta en una técnica de afinidad
  utilizando sondas de ácidos nucleicos para
  hibridación soportadas en un chip.
• Es una aplicación de la Bioinformática.
• Un microarray es una herramienta para analizar la
  expresión genética que consiste en una pequeña
  membrana o un portaobjetos de vidrio que
  contienen muestras de muchos genes organizados
  según un petrón determinado.

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(No Transcript)
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(No Transcript)
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(No Transcript)
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Experimento con un Microarray de ADN
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VENTAJAS DE LA DETECCIÓN RÁPIDA DE LA RESISTENCIA
MEDIANTE TÉCNICAS MOLECULARES

• Reducir el tiempo requerido para instauración
  tratamiento definitivo
• Evitar tratamientos incorrectos
• Detección de portadores infectados con
  microorganismos resistentes
• Reducción de costes y tiempo de estancia
  hospitalaria

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INCONVENIENTES DE LAS TÉCNICAS MOLECULARES DEN LA
DETECCIÓN DE RESISTENCIAS

• Desconocimiento de la secuencia del gen/es
  implicados
• Casos con múltiples genes implicados
• Diferente grado de expresión de los genes en
  condiciones ambientales diferentes
• Los microorganismos de la flora saprofita poseen
  también genes de resistencia

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DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO UTILIZACIÓN

• Agente causal
• No cultivable
• Peligroso su cultivo
• Crecimiento lento
• Cambiar el diagnóstico o el tratamiento
• Comprender el proceso de la enfermedad
• Estado inmunológico del paciente.
• Datos para Epidemiología.

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DETERMINACIONES SEROLÓGICAS

• Inmunofluorescencia
• Directa
• Indirecta
• Radioinmunoanálisis
• Enzimainmunoanálisis
• ELISA tipo1
• ELISA tipo2
• ELISA tipo3 (captura)

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DETERMINACIONES SEROLÓGICAS

• Precipitación
• Medio sólido
• Medio líquido
• Aglutinación
• Directa
• Hemaglutinación
• Látex
• Fijación de complemento

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Interpretación de la Serologia

• Parejas de sueros
• - Seroconversion. Negativo a Positivo
• - Serorefuerzo. Titulo .inicial x 4 o más.
• Infecciones cronicas.
• -Deteccion IgM.
• Acs frente a diversos antigenos.
• Periodo Ventana

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Diag. Serológico. Infecciones

1. Valoración de IgG E IgM específica.
2. Valoración de IgG. Avidez.
3. Diagnóstico de Primoinfección.

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Diag. Serológico. Objetivos

• Diag. Etiológico por la Respuesta Inmune Humoral.
• Determinar Protección Frente a Infecciones.
• Determinar Prevalencia de Infecciones.

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DETECCIÓN DE RESPUESTA INMUNE CELULAR

• Pruebas cutáneas
• Activación linfocitaria
• Inhibición de los macrófagos
• Linfotoxicidad.
• Actualmente NO se usan