?????? Polymerase chain reaction, PCR

1
??????Polymerase chain reaction, PCR
2
?????PCR?

• PCR???????DNA???????DNA?????,??????????????
  ?DNA???

3
??PCR????????

• 1869? Friedrich Miescher ??DNA?
• 1953? Waston?Crick???DNA??????
• 1958? Matthew Meselson?Franklin Stahl??
• ?DNA?????????
• 1960s?????????? ?
• 1960????70?????????????
• 1985? ??PE-cetus???????????
• mullis?????PCR???

4
??PCR?????

• ?????DNA????
• ?
• ?????????????DNA??
• ?
• ?Taq DNA???,dNTPs,Mg2???pH????????????
• ?
• ?????????????????25-40??????????????,
• ??????????????

5
PCR?????
??DNA
??,??
DNA????????,????????DNA
????,??
6
?????DNA??
????
???????DNA?????DNA?
????????,??DNA????
7
??PCR??????

• PCR??????
• ??DNA?????? dNTP?Mg2 ?????

8
1. DNA??

• ????,????
• ??????
• ??????
• ???????
• ????????PCR?????,????DNA?

9

• ???DNA????
• ???????????,????????????,??????????????????,??????
  ??
• ???DNA????
• ???????(????)????,????PCR???

10
2.??Primer

• ??(primer)?PCR????????,PCR??????????????,?
  ??????DNA???????????????????
• ????????????????????

11
????????

• ???????1530bp??
• ?????????200500bp??
• ???????????
• ????GC????4555??

12

• ????????????
• ??????
• ??3????????DNA????
• 3??????????T?C?G,???A

13

• ??5????????????
• ???????????????
• ???????0.10.5µmol/L,????????????????

14
3. ?????????dNTP

• ?????20-200µmol/L
• ?????dNTP?????????????????????
• ??dNTPs???????
• dNTP?????????,???dNTP??510mmol/L???,?NaOH?pH???,?
  ??-20??? ?

15
4. Taq DNA???

• ????PCR?????Klenow?
• ???????
• ????????
• ????Taq DNA???,??????????
• ??1-2.5U/100µ1??????

16

• ???????Taq DNA?????
• ??????????????
• ????????????

17
5. Mg2

• Mg2????DNA?????????
• Mg2??????1.52.0mmol/L,??dNTP???200µmol/L???
• ????????DNA?????????????EDTA,??????????????????,?
  ????

18
6.???????

• ??????????1050mmol/L Tris-HCl(pH8.38.8,20?)?
• ??????50mmol/L???KC1???????.
• ???????(100µg/ml)???(0.01)?Tween
  20(0.05-0.1)???Taq DNA???????
• ??????????(10)????(DMSO)?????????,??PCR??????

19
??PCR??????

• 1. ?????????
• ?????,94? 1min???????????
• ?????????????,??Taq DNA??????dNTP???????

20

• 2. ?????????
• ???????PCR??????,???????????GC???
• ??????1525bp???,???????????Tm4(GC)2(AT)

21

• 3.?????????
• ???????7075???,??,Taq DNA???????????????????????
  ??
• ???????????????72 ?????????35100????/??

22

• 4.????
• ????????????
• ?????????????,???????????DNA??????
• ?????DNA?3105,1.5104,1103?50?????,????????2530
  ,3035,3540,4045?
• ??????????????????

23

• 5???????
• ?1 ?????? ?2 ???????
• yA2n
  yA(1R)n
• y???? n???? A??????R??????

y
y
n
n
24

• ???PCR??????100
• ?PCR?????,??DNA???????,?????????,???dNTPs?????????
  ???????????,PCR??????,PCR?????????????????????????
  ??
• ??YA(1R)n???PCR?????

25
??????

• ???????????????? ???
• ????????????,?????????(?,HLA-DQa??)
• Southern????????????????????????,?????????????
• PCR-ELISA,PCR-EIA,PCR-OLA?????????????

26
PCR?????

• 1. ??????
• 2. ??????
• 3. ??????
• 4. ????????

27
PCR??????

• Taq DNA???????PCR?????????
• 1988?,PE-cetus???????PCR????
• 1995?,??PCR????

28
???PCR?????

• ?????3????????,????????????????????
• ???????,???
• ?????,???????

29

• ?????/???????
• ??????????????????????,??????????,????????????
  ????????
• ??????????,???
• ??????????????,
• ??????

30

• ???????????
• ??????????,?????????????PCR???
• ??????????
• ??????,?????
• Taq DNA???????

31
(No Transcript)
32
(No Transcript)
33
(No Transcript)
34
PCR?????
35

• ??????????
• ???????

1 2 3 4
1.????? 2.Basts???? 3.?????????? 4.?????
PCR??a-??Basts??????
36
??????

• ?????????(human immunodeficiency
  virus,HIV)?????
• ??????????????????????
• PCR??????????????????,???????DNA?????????,????????
  ???????????

37
??????????

• ??ras???
• p53???
• PCR ???????????

38
PCR????????

• ??????
• ????
• ????
• 1985?,??????Jeffreys???DNA???(DNA
  fingerprint),??????????????????????????(RFLP)?

39
PCR??????????????

• DNA??
• ???????????
• ??PCR
• DNA?????
• ????

40
??!