Saliva, o noua sursa neinvaziva de determinari biochimice

1
Saliva, o noua sursa neinvaziva de determinari
biochimice
2
SALIVA

• CE ESTE ?
• CARE ESTE COMPOZITIA ACESTEIA ?
• CE ROLURI ARE ?
• CE COMPUSI PUTEM DETERMINA ?
• CE SEMNIFICATIE CLINICA AU ?

3
Sa analizam saliva

• oglinda organismului
• fluid heterogen cu proteine, electroliti, hormoni
  si alti compusi transportati din sange
• solutie de spalare, un lubrifiant, rezervor de
  ioni, sistem tampon si antioxidant remarcabil
• prima linie defensiva in stresul oxidativ

4
Cavitatea orala

• mediu extrem de dinamic si unic
• singurul loc din organism unde tesuturile
  mineralizate sunt expuse mediului exterior si
  care implica interactiuni complexe intre
  suprafete diferite, tesut gazda moale si
  tare/alimente/aer/microorganisme
• scaldata permanent de saliva, care încearca sa
  faca fata unui mediu extrem de dinamic

5
AVANTAJELE SALIVEI

• recoltare rapida, oriunde , oricand si
  nestresanta
• stabilitate mare a probelor si posibilitate
  pastrarii lor indelungate
• tehnica neinvaziva
• repetarea testelor se realizeaza mai usor
• minimalizarea contaminarii pacientilor si a
  personalului medical
• concordanta excelenta cu nivelul sanguin pentru
  aproape toti compusii
• sensibilitate comparabila cu a sangelui si
  specificitate mai mare in unele cazuri

6
To be continued

• ofera posibilitatea efectuarii unor studii in
  dinamica
• permite o colaborare mai stransa si permanenta cu
  pacientul
• nu necesita un echipament special
• se preteaza excelent pentru screening

7
Interesul pentru saliva

• evolutia tehnicilor de determinare cu o mare
  sensibilitate?concentratia componentelor salivare
  este de 10-100 de ori mai mica decat in sange
• saliva - unanim recunoscuta ca mijloc de
  investigare si diagnostic in mai multe domenii
  medicale endocrinologie, medicina legala,
  toxicologie, medicina interna, medicina dentara

8
Mandel spunea

• Saliva nu este un lichid obisnuit aceasta este
  lipsita de sinceritatea transpiratiei,
  dramatismul sângelui si elocventa lacrimilor
• a devenit o alternativa neinvaziva pentru
  biochimia clinica

9
Functiile salivei

• protectie împotriva infectiilor bacteriene,
  virale si fungice
• implicata în masticatie, deglutitie, vorbire,
  retentie dentara, degustare si probabil în
  comunicarea chimica(sarut !!!!!)

10
(No Transcript)
11
(No Transcript)
12
Provenienta salivei

• produsa de trei glande majore (2 parotide, 2
  submandibulare si 2 sublinguale) si de glande
  minore(GSM) localizate în buze, mucoasa orala si
  limba
• contributia relativa a glandelor salivare
  individuale la saliva totala este diferita în
  conditii normale si de stimulare

13
Saliva reziduala

• produsa în proportie de 60 de glanda
  submandibulara / sublinguala si 30 de parotida
• prezenta aproape permanent în cavitatea orala

14
SALIVA TOTALA

• secretata de glandele salivare dar include si
  constituenti proveniti din sânge, bacterii si
  produsi ai acestora, virusi, celule epiteliale
  descuamate, electroliti, fluid crevicular si
  resturi alimentare ?
• ideala pentru identificarea unor biomarkeri ai
  afectiunilor orale si sistemice
• frecvent studiata pentru evaluarea afectiunilor
  sistemice

15
(No Transcript)
16
Saliva totala

• Constituentii serici (medicamente, hormoni)
• ajung in saliva pe cai diferite transport activ,
  difuzie pasiva si ultrafiltrare
• sau ca rezultat al secretiei fluidului crevicular
• in functie de gradul de inflamatie al gingiei,
  fluidul crevicular, f. mult studiat in ultimul
  timp- considerat fie un transudat seric sau, mai
  frecvent, un exudat inflamator ce contine
  constituenti serici

17
Recoltarea salivei

• Cu/fara stimulare
• Stimulare masticatia - guma de mestecat sau
  parafina
• - gustativa aplicare de acid
  citric pe limba
• Afecteaza concentratia unor constituenti
• Saliva nestimulata- afectata de gradul de
  hidratare, expunerea la lumina, pozitia corpului,
  momentul recoltarii

18
COMPOZITIA SALIVEI

• Componentii salivei - mirror of the bodys
  health"

19
COMPOZITIA CHIMICA

• mai mult de 99 apa- cel mai apos produs de
  secretie al organismului
• substanta uscata ( ? 0,5) substante organice
  (2/3) si anorganice (1/3)-foarte dependenta de
  alimentele ingerate

20
Compusi anorganici si organici

• cele mai importante componente anorganice-Ca,
  fosfat
• bicarbonat, Na, K, Cl, I, F,
• cele mai importante componente organice-proteinele
  
• identificate prin electroforeza cel putin 150
• Saliva totala - ? 2,2 g/L (10-500µg/mL) salivar

21
Componentele salivare majore

• Histatine 2-4 kDa
• Staterina 4-6 kDa
• Lizozimul 14 kDa
• Cistatine 14 kDa
• PRP 10-30 kDa
• AC 42-65 kDa

22
To be continued

• Amilaza 56-60 kDa
• Peroxidaze 75-78 kDa
• Lactoferina 75-78 kDa
• Mucina 2 (MG2) 130 kDa
• IgAs 280 kDa
• Mucina 1 (MG 1) gt1000 kDa

23
(No Transcript)
24
Albumina

• 1 -10 din proteinele totale salivare si
  concentratia ei scade cu cresterea fluxului
  salivar
• rol antioxidant uratul si ascorbatul
• Valori crescute la pacientii supusi
  chimioterapiei si la care apare stomatita?marker
  predictiv al complicatiior
• Valori scazute la pacientii diabetici, probabil
  datorita accentuarii stresului oxidativ la
  nivelul cavitatii orale, in conditiile existentei
  unei boli parodontale

25
To be continued

• rolul albuminei in saliva, desi minor, nu poate
  fi neglijat, deoarece, în absenta acesteia,
  activitatea de scavenger a uratului scade
• scaderea albuminei la pacientii cu
  parodontopatii indica un consum accentuat al
  acestei proteine , in conditiile cresterii
  stresului oxidativ

26
Saliva mai contine

• Factori de crestere factorul de crestere
  neuronal (NGF), epitelial (EGF), insulin-like
  (IGF)- justifica activitatea paracrina si
  endocrina a glandelor salivare
• în saliva parotidiana parotina -activitate
  hormonala-implicata în calcifiere si mentinerea
  homeostaziei calcemice
• chemokine si citokine -implicate în procese
  acute, inflamatorii si imunoreglatoare
• Chemokinele si receptorii lor - cheia întelegerii
  infectiilor cu HIV

27
Citokinele salivare

• grup de GP cu rol imunoreglator
• secretate si de keratinocitele mucoasei orale ?
  mucoasa are, pe lânga alte functii si o foarte
  importanta functie imunitara
• implicate în inflamatie, apararea antivirala si
  antitumorala

28
Compusi cu greutate moleculara mica

• saliva totala ? 18 aminoacizi
• cel mai abundent Gly- probabil datorita
  scindarilor hidrolitice ale proteinelor prin
  intermediul enzimelor bacteriene
• GABA si fosfatidiletanolamine
• tetrapeptina (Gly-Gly-Lys-Arg) - implicata în
  metabolismul placii dentare

29
Alte proteine salivare

• proteina care îndeparteaza mirosul -odorant
  binding protein- leaga acidul 3-metil-2-hexenoic,
  componentul major al mirosului transpiratiei
• aceeasi proteina - implicata în respiratia
  patologica, cu miros neplacut (ca o sursa de
  acizi volatili) si în comunicarea chimica
  (sarutul !!!!, salivatia sugarilor la vederea
  parintilor )

30
Sialina

• oligopeptida
• stimuleaza metabolismul bacteriilor prin
  cresterea producerii de acid lactic din glucoza
• cresterea pH-ului prin sinteza de compusi bazici
• responsabil - un rest de Arg (din cei 4 AA ai
  peptidei)
• denumita si factor de crestere a pH-ului
• rezultatul amplificarii metabolismului -
  îndepartarea rapida a glucidelor
• important sistem tampon alternant sistemului
  bicarbonat

31
DEFENSINELE

• Ce denumire sugestiva !!!!
• Peptide cu valente antimicrobiene si citotoxice
• Valori crescute în saliva au fost detectate la
  pacientii cu cancere orale

32
Istoric

• Surprinzator- saliva a fost utilizata in scop
  diagnostic in urma cu aproape 2000 de ani !!!
• In medicina traditionala chineza- saliva si
  sangele- are brothers
• Au origine comuna ? semnificatie diagnostica
• hipersalivatia?arsuri gastrice
• saliva dulce in afectiuni ale splinei sau
  intoxicatii cu metale

33
Afectiuni sistemice (ereditare, autoimune, cancer
si boli infectioase)

• Afecteaza direct sau indirect glandele salivare ?
  volumul si compozitia salivei
• Modificarile unor markeri specifici ?
  diagnosticul si prognosticul acestor afectiuni

34
BOLI EREDITARE

• Fibroza chistica- concentratii salivare crescute
  de calciu, fosfati(incidenta calculilor dentari
  la copii), proteine si lipide(alterarea
  proprietatilor fizico-chimice ale salivei), uree,
  acid uric, prostaglandine si EGF(epidermal growth
  factor) cu activitate biologica scazuta
• 17-OHP(17-hidroxi-progesterona)- excelent test
  screening hiperplazia congenitala a glandelor
  suprarenale-corelare perfecta intre nivelul
  salivar si cel sanguin

35
Afectiuni autoimune

• Alterare- flux salivar, pH, capacitate tampon,
  profilul citokinelor-diagnosticul si
  monitorizarea sindromului Sjögren

36
CANCER

• Datorita localizarii sale, saliva fluid biologic
  ideal pentru screening-ul leziunilor orale
  premaligne si maligne, prognosticul malignizarii
• Markerii tumorali identificati in saliva utili
  in screening-ul afectiunilor maligne orale-
  anticorpii p53(P53 mutation and mitotic
  infidelity !!!!) si defensinele
• Nivelul catechinelor salivare(provenite din ceai)
  si activitatea catechin-esterazei salivare-rol în
  prevenirea cancerului oral si esofagian
• Prognosticul cancerului de san si ovar

37
Boala Alzheimer

• Activitatea acetilcolinesterazei salivare -
  marker util al modificarilor asociate bolii si al
  eficientei terapeutice cu inhibitori ai enzimei

38
Saliva-mediu ideal

• pentru evaluarea markerior turnoverului tesutului
  osos
• impact deosebit in implantele dentare
• diagnosticarea si monitorizarea osteoporozei si
  parodontopatiilor
• fosfataza alcalina, osteocalcina, osteopontina,
  etc.

39
Afectiuni virale

• Saliva- o alternativa utila pentru diagnosticul
  hepatitelor virale(A, B, C)
• sensibilitate si specificitate remarcabile

40
HIV

• Teste salivare pentru diagnosticul HIV-Orasure
  (SUA)
• recoltarea si analiza salivei modalitate simpla,
  sigura, rapida, bine tolerata si precisa de
  diagnosticare a infectiei cu HIV
• concordanta excelenta între concentratia sanguina
  si cea salivara
• saliva pacientilor infestati cu HIV - cantitati
  semnificativ mai mari de colagenaze si inhibitori
  ai acestora, comparativ cu pacientii care nu sunt
  seropozitivi-HIV

41
Monitorizarea medicamentelor

• Avantajele salivei
• - corelare perfecta intre nivelul salivar si cel
  sanguin?index al nivelului sanguin(etanol)
• - apar rapid in saliva?detectare rapida
• - monitorizare rapida a nivelului unor
  medicamente sau depistarea consumului acestora
• - monitorizarea expunerii la tutun (tiocianat ,
  cotinina, enzime) sau toxine, consumul de droguri

42
Toxine

• Determinarea concentratiei salivare a PG a
  evidentiat la fumatori o incidenta crescuta a
  afectiunilor orale corelata cu o concentratie
  salivara scazuta a acestor compusi
• Saliva - mediu optim de monitorizare a unor
  substante chimice toxice pentru organismul uman
  (pesticide, tetraclorura de carbon, nitratI,
  etc.) reprezantând în acelasi timp si o
  modalitate de evaluare a concentratiei tisulare a
  acestor compusi

43
Substante sau compusi care sunt corelati cu
nivelul de stres

• Modificari ale unor componente salivare,
  glucagon, cortisol, adrenalina, noradrenalina,
  dopamina, peroxizi lipidici, antioxidanti, sunt
  relevante în stres, asa cum au evidentiat
  determinarile efectuate pe personalul medical de
  pe ambulante, pacientii care se prezinta la
  cabinetele stomatologice, etc.
• Remarcabila este si corelarea perfecta între
  parametrii salivari si cei sanguini în stresul
  oxidativ

44
HORMONI

• Concordanta excelenta între concentratia sanguina
  si cea salivara
• Reflecta concentratia hormonilor liberi
• Saliva- curent folosita pentru determinarea de
  cortisol, dehidroepiandrosterona, testosteron,
  estradiol, estriol si progesterona
• monitorizare a pubertatii precoce sau întârziate,
  a hiperplaziei corticosuprarenalei, bolii
  Addison, amenoreei, hipopituitarismului,
  dezvoltarea fatului în ultima perioada a sarcinii
• progesterona si estradiolul în saliva s-a impus
  ca o metoda neinvaziva de investigare a functiei
  ovariene

45
Hormoni

• Cortisolul( C ), testosteronul( T ) si raportul
  T/C în saliva variaza semnificativ în timpul
  competitiilor sportive si in perioada de
  recuperare
• Cortisolul salivar creste semnificativ în cursul
  competitiilor sportive nivelul salivar al
  testosteronei fiind neafectat
• La sfârsitul competitiei, cortisolul scade
  rapid, în aproximativ 1,5 ore, la valoarea bazala
  iar testosterona creste rapid, rezultând un
  raport T/C foarte mare. In perioada de recuparare
  fizica, raportul se mentine crescut , gt30 fata
  de conditiile bazale, timp de 5 zile

46
Cortisolul salivar

• Raportul T/C scazut din timpul competitiei
  corespunde fazei catabolice
• Perioada de refacere post-competitionala se
  caracterizeaza printr-o senzatie de oboseala,
  incapacitate de antrenare intensiva, recunoscuta
  si de antrenori si, paradoxal, printr-un raport
  T/C mare, corespunzator asa-numitei faze
  anabolice
• cortisolului salivar faciliteaza diferentierea
  pacientilor cu obezitate de cei cu sindrom
  Cushing si poate fi un parametru util de
  screening pentru pacientii cu sindrom Cushing

47
Determinari de Ig

• sportivii de performanta(atleti, jucatori de
  tenis, schiori) -stresul fizic din perioada
  antrenamentelor si a competitiilor induce o
  supresie a sistemului imunitar oral ?diminuare
  semnificativa a IgA salivara
• La aceleasi concluzii -studiu efectuat cu cadre
  didactice, în timpul anului universitar si
  studenti, dupa o sesiune de examene
• Persoanele cu buna dispozitie, cu mult umor, se
  caracterizeaza printr-o concentratie crescuta de
  IgA salivara si deci predispozitie mai mica la
  afectiuni respiratorii sau oro-dentare

48
To be continued

• Extrem de utila in screening-ul infectiilor
  virale(virusul herpesului la om, citomegalovirus,
  Epstein-Barr)
• IgA cel mai bun marker al infectiei cu
  rotavirus(RV)
• IgAs - rol major în mecanismul de aparare local
• relatie inversa între IgAs si susceptibilitatea
  la carii
• subiectii cu concentratii salivare mici de IgA si
  IgM -incidenta mare a cariilor dentare

49
Boli infectioase

• Posibilitatea monitorizarii prin detectarea de
  anticorpi specifici in saliva
• Helicobacter pylori stimuleaza sinteza de
  anticorpi specifici IgG (ELISA si PCR)
• A relevat prevalenta in saliva?explica
  transmiterea pe cale orala

50
Alte aplicatii ale determinarilor salivare

• Gangliozidele din glandele salivare au probabil
  un rol în complicatiile din diabet.
• Studiile releva ca polimorfismul
  dezoxiribonucleazei I în saliva este deosebit de
  util în medicina legala
• Factorul de activare plachetar(PAF) detectat în
  saliva persoanelor sanatoase si nivelul sau este
  crescut în parodontopatii
• Sursa celulara de PAF salivar este controversata
  desi numeroase date sugereaza originea sa în
  relatie cu prezenta inflamatiei

51
Recent

• diagnosticarea unor afectiuni dureroase
  cronice(artrita reumatoida, osteoartrita,
  migrenele, etc.) prin estimarea concentratiei
  salivare de serotonina, substanta P(SP),
  calcitonin gene-related peptide(CGRP), factorul
  de crestere neuronal(NGF)
• Concentratiile salivare ale acestor parametrii
  sunt semnificativ crescute la pacientii cu astfel
  de afectiuni, comparativ cu persoanele sanatoase.
• Concentratiile salivare ale SP si CGRP sunt de
  aproape 3 ori mai mari decât în plasma

52
In patologia orala

• Parametrii salivari ca peroxidaza salivara,
  acidul uric, albumina, acidul ascorbic, GGT-
  indicatori ideali ai stresului oxidativ din
  diferite afectiuni orale gingivite,
  parodontopatii, etc.
• Potentialul antioxidant al salivei, asigurat în
  principal de acidul uric, precum si concentratia
  antioxidantilor salivari scad în gingivite si
  parodontopatii
• Activitatile mieloperoxidazei din LPMN
  polimorfonucleare, determinata prin
  chemiluminescenta LPMN si peroxidazei salivare
  cresc în gingivite si parodontopatii, constituind
  un bun indicator al procesului inflamator

53
Markeri ai afectiunilor orale

• AST si FA din saliva markeri ai afectiunilor
  parodontale
• sistemul enzimatic salivar-compromis in cazul
  expunerii la fum de tigara
• GGT salivar marker al stresului oxidativ indus
  de fumul de tigara

54
To be continued

• cistatina S salivara - biomarker al rezistentei
  la placa bacteriana
• nivelului salivar al amilazei si lizozimului
  -modalitate neinvaziva de monitorizare a
  activitatii glandelor salivare
• Trombomodulina( TM )-proteoglican din
  keratinocitele gingivale poate regla activitatea
  trombinei
• rol anticoagulant major- receptor al trombinei-
  actioneaza ca si cofactor în activarea proteinei
  C
• scazuta în inflamatiile gingivale si
  parodontopatii
• Parodontopatiile din diabet se coreleaza cu
  valori crescute ale metaloproteazelor
  salivare-utile astfel în monitorizarea
  afectiunilor parodontale asociate diabetului

55
Perspective

• elaborarea unor biomolecule în care domeniile
  structurale sa corespunda unor necesitati
  individuale
• saliva artificiala care sa includa oligozaharide
  ale PRG - facilita lubrifierea în masticatie
  diminuând astfel abraziunile asociate xerostomiei
• un domeniu adeziv de la mucina sau fibronectina,
  prin cuplare cu un domeniu de la lactoferina sau
  peroxidaza ? tratamentul afectiunilor orale
  asociate placii dentare

56
Continuarea investigatiilor pe saliva

• va conduce cu siguranta la descoperirea unor noi
  utilitati, saliva putând sa ne ofere în
  continuare multe surprize
• Era genomica in care am intrat a deschis noi
  perspective determinarilor pe saliva-determinari
  de ADN, ARN
• Dovada initierea in 2004 a unui consortiu de
  cercetare multidisciplinara da catre National
  Institute of Dental and Craniofacial Research
  pentru elaborarea unui catalog complet al
  proteinelor salivare (Human Salivary Proteome
  Project)