Title: DDP Double Digest Problem
1DDPDouble Digest Problem
- présenté par
- Patrick Charbonneau
Cours IFT 6100 Université de Montréal
2Au menu
- Définition des enzymes.
- Définition, origine et utilisation des
endonucléases. - Définition et utilisation des cartes de
restriction. - Théorie des Cassettes.
3Les enzymes
- - Molécules de nature protéique.
- Agissent comme catalyseur en augmentant la
vitesse de réaction. - Possèdent une grande spécificité pour le
substrat sur lequel elles - agissent.
4Les enzymes
- - Molécules de nature protéique.
- Agissent comme catalyseur en augmentant la
vitesse de réaction. - Possèdent une grande spécificité pour le
substrat sur lequel elles - agissent.
5Les enzymes
- - Molécules de nature protéique.
- Agissent comme catalyseur en augmentant la
vitesse de réaction. - Possèdent une grande spécificité pour le
substrat sur lequel elles - agissent.
6Les enzymes
- - Molécules de nature protéique.
- Agissent comme catalyseur en augmentant la
vitesse de réaction. - Possèdent une grande spécificité pour le
substrat sur lequel elles - agissent.
7Les enzymes
- - Molécules de nature protéique.
- Agissent comme catalyseur en augmentant la
vitesse de réaction. - Possèdent une grande spécificité pour le
substrat sur lequel elles - agissent.
8Les enzymes
- - Molécules de nature protéique.
- Agissent comme catalyseur en augmentant la
vitesse de réaction. - Possèdent une grande spécificité pour le
substrat sur lequel elles - agissent.
9Les enzymes
- - Molécules de nature protéique.
- Agissent comme catalyseur en augmentant la
vitesse de réaction. - Possèdent une grande spécificité pour le
substrat sur lequel elles - agissent.
10Les enzymes
- - Molécules de nature protéique.
- Agissent comme catalyseur en augmentant la
vitesse de réaction. - Possèdent une grande spécificité pour le
substrat sur lequel elles - agissent.
11Origine des enzymes
La vie a eu plusieurs millions dannées pour
créer ces enzymes. Cest surtout au niveau des
bactéries que ces enzymes ont été créées et
testées. Les enzymes actuelles sont optimales et
ne laissent aucune place à lamélioration.
12Les nucléases
Ce sont des enzymes spécialisées dans la
dégradation des acides nucléiques et ce sont ces
enzymes qui ont permit à la science deffectuer
des découpages non aléatoire de génome in
vitro. Il existe deux grandes catégories de
nucléases caractérisées selon leur mode
d'action. les exonucléases qui dégradent par
excision du nucléotide situé en extrémité de
chaîne. Habituellement, a partir du coté 3. Et
les endonucléases qui coupent des liaisons
phosphodiester à lintérieur même de la chaîne
dADN.
13Les endonucléases
Parmi ces endonucléases, certaines sont non
spécifiques et hydrolysent des liaisons
phosphodiester au hasard, tandis que d'autres
hydrolysent des liaisons phosphodiester
uniquement à lintérieur de site spécifique
reconnue par lenzyme.Autrement dit, cette
dernière est communément appelée endonucléase de
restriction.
14Les endonucléases
Parmi ces endonucléases, certaines sont non
spécifiques et hydrolysent des liaisons
phosphodiester au hasard, tandis que d'autres
hydrolysent des liaisons phosphodiester
uniquement à lintérieur de site spécifique
reconnue par lenzyme.Autrement dit, cette
dernière est communément appelée endonucléase de
restriction.
15Les endonucléases
Parmi ces endonucléases, certaines sont non
spécifiques et hydrolysent des liaisons
phosphodiester au hasard, tandis que d'autres
hydrolysent des liaisons phosphodiester
uniquement à lintérieur de site spécifique
reconnue par lenzyme.Autrement dit, cette
dernière est communément appelée endonucléase de
restriction.
16Les endonucléases
Parmi ces endonucléases, certaines sont non
spécifiques et hydrolysent des liaisons
phosphodiester au hasard, tandis que d'autres
hydrolysent des liaisons phosphodiester
uniquement à lintérieur de site spécifique
reconnue par lenzyme.Autrement dit, cette
dernière est communément appelée endonucléase de
restriction.
17Les endonucléases
On remarque ici que les extrémités sont décalées
et débordantes du cotés 5. Ces extrémités sont
appelées extrémités cohésives car, en raison de
la structure palindromique des séquences de
reconnaissance, elles ont tendance à s'hybrider
en solution, surtout en présence de ligase. Utile
pour la recombinaison in vitro et pour la
construction de molécules chimères.
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25Cartes de restriction(cartes physiques)
En utilisant les propriétés des enzymes de
restriction, qui reconnaissent des points précis
du génome au nucléotide près, l'identification
des sites de coupure permet d'établir une carte
extrêmement détaillée appelée carte de
restriction.
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39MERCI!!!