TECNICAS PARA ANALISIS DE ACIDOS NUCLEICOS

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TECNICAS PARA ANALISIS DE ACIDOS NUCLEICOS
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ELECTROFORESIS
La electroforesis de ácidos nucleicos en geles de
agarosa, permite separar fragmentos de DNA de
diferente tamaño. Sin embargo, no se puede saber
en cuál de los fragmentos se encuentra el gen o
la secuencia de DNA que se busca.
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HIBRIDACION DE ÁCIDOS NUCLEICOS
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El DNA puede sufrir un proceso reversible de
separación y reasociación de hebras
DNA en estado nativo Denaturado
Renaturado
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(No Transcript)
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Paso 1 Separación de fragmentos de
RNA por electroforesis.
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(No Transcript)
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Paso 2 Transferencia del RNA al
filtro o membrana
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Paso 3 Hibridación con la sonda específica
complementaria
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Paso 4 Lavado y detección de la
sonda marcada
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La hibridación con sondas específicas permite
determinar la identidad de un fragmento de DNA o
RNA
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La hibridación en condiciones de mayor
estringencia garantiza una mayor especificidad en
la interacción.
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• TIPOS DE HIBRIDACION
• Tipo de interaccion DNA DNA / DNA RNA/ RNA
  RNA
• Hibridación en filtro Southern
• Northern
• Colony Hibridization
• Dot-blot
• 3. Hibridacion en solución substractiva
  columna de hidroxiapatita
• 4. Hibridacion in situ

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Colony hibridization Por hibridación en colonia,
se puede identificar cuáles de las colonias
recombinantes obtenidas, tiene clonado un
fragmento de DNA en particular.
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SECUENCIAMIENTO

• Uso de dideoxinucleótidos (ddNTPs)
• 4 reacciones por separado, en paralelo.
• Separación de fragmentos producidos por
  electroforesis en gel de secuenciamiento
• Animación (Lodish)

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Se realizan 4 reacciones por separado
Oligonucleótido o PrimerTemplado
Figure 7-29a