helmapazhouhankia .

1
?? ??? ???

• ????? ????? PCR
• ????? ??????
• ???? ???? ??????
• ??????
• ???? ?????? ???

2

PCR (Polymerase Chain Reaction)
3

• ????? ?????
• 1-???????
• ???? ?????
• ??????? ?????
• PCR?????
• ????????????
• ??????? ?????
• ???? ??? ?? ????? ?????
• PCR?????
• ???????
• PCR?????
• ????? ? ?????
• ????????? ?????
• ?????? ????
• ????? ??

4
???????PCR

• ?? ????? ???? ????? ????? ?????????? ?????? ??
  ??? ??? ??????? ??????? ???????? ? ?? ???? ????
  ????? ???? ??? ????? ?? ?? ?? ???? ??? ?? ?? ??
  ???? ???? ????? ???? ???? ? ?? ?? ?????? ????? ??
  ??????.
• ??? ??? ?? ?? ???? ???? ? ???? ?? ??? ????
  ?????? ??????.
• ????? PCR ????? ?????? ?? ??????? Polymerase
  Chain Reaction ?? ????? ????? ?? ???? DNA ??
  ??? ???? ???? ??? ????? (Kary Mullis) ??????
  ???? Cetus ????? ??? ???
• PCR  ?????? ?????? ???? ?? ????
• ????? ?? ???? ????? ??? ????? ???? ????? ?????
  ????? ? ??? ?????? ??????? ???? ? ??????? ??
  ????? ??????? ?????? ??? ?????? ???? ????? ?
  ?????? ???????????? ? ?????? ????? ????? ???.
• ??? ????? ????? ?????? ???? ?? ???? ??????? ??
  ???? ?? ??? ?????? ?? ?????? ???? ?? DNA ?????
  ??? ?? ????? ??? ? ?????? ??????? ?? ?????
  ???????????? ???? ??????? ??? ?????? ?????? ????
  ? ?? ???? ???????? ?????? ? ???????? ????? ??
  ???.
• ?? ???? ???? ??? ?? ??? ????? ????? ???? ?? ???
  ????? ????? ?????.

5
???? ?????PCR

• PCR??????? ??? ?? ?? ??????? ?? ?? ?? ???? ?? ???
  ???? ?????? ???? ???? ?? ?????? DNA?? ??? ??? ??
  ?????? ??????????? ?? ???? ?? ????? ???? ??????
  ??????? ??????,???? ??? ??? ?????? ????????????
  ?? ?????? ???????? ?? ???? ?????? ????? PCR
  ??DNA?????? ?? ???
• . ???? DNA ???? ???
• ?? ??
• ???? ?? ?? ????????
• ?? ??? ???? ?? ???? ?? ????? ????.
• ???? ??? ??? ????? ???? ???? ? ????? ?????
  ?????????? DNA ?? ??????? ???? ????
  ????? DNA  ??????? ???? ?? ????. ?? ??????? ?????
  ?????? ?? ?? ??? ??????? ? ????? ?? ?????? ??????
  ???? DNA ??? ????? ?? ???? ?? ?? ????? PCR ????
  ??? ???? ????? DNA ??????? ????? ?? ????? ??
  ??? Taq polymerase  ?? ????? ????? ????? ?????? ?
  ??????????? ??????? ?? ???.
• ?? ??? ????? ????? ???????? DNA  ???????? ?????
  ?? ??? ? ???? ?? ??????? ??PCR ? ??? ?? ?????
  ???? ? ???? ?????????? ?? ????? ?? ????? ?? ?????.

6
??????? PCR

• DNA-1 ???? (Template   DNA)
• ??????? ???? ?? ??????? ?? DNA  ???????? ?? ????
  ?? ?? ???????? ?? DNA ????? ???? ??
  ????? PCR ???? ???.
• ??? ?? ??? ?????? ???? ????? ??????? ??? ???????
  (????? DNA ????? ??? ?? ???? ???? ???)?? ??? .
• ????? ?? ????? DNA ??? ???? ???? ??? ????? PCR ??
  ??? ????? ???? ???? ??? ?? ????.
• ????? ????? DNA ??? ??? ??? ?? ???? ?? ???? ?????
  ??????? ???? ??????? ?? ????? ??????? DNA ??? ???
  ? EDTA? ???? ???? ?????? ????? Taq polymerase ?
  ??? ???? ????? ???? ??? ?? ????.
• ?????? ????? ??? ????? PCR ?? ?????? ????? ????
  DNA ?? ?? ???? ?????? ?? ???? ?????? ??? ??????
  ??? ?????? ???? ??? ?? ????? ????? ??? ????
  ?????? ????????.
• -2?????? ????????? ??? ????? (dNTPs)
• ???? ????????? ????? ????? ????DNA ? ???? ???
  ???????? ????? ?? ???? DNA ??????? ???? ?????
  ???? ??? DNA? ???? ???? ?????? ? ???? ???? ??
  ???? ???? ?? ???? ???? ?? ????? ????. ???? ????
  ???? ?? ?? ?? ?? ??????????? ???? ????? PCR ?????
  ? ????? 200 ???? ????? ?? ????. ???? ??? ????? ??
  ????? ??? ?????? ???? ?? ???? ????????? ?? ??
  ???? ??? ????? ??? ?? ???? ?????? 10 ???? ????? ?
  25 ???? ????? ????? ????

7

• 3 ????????? Forward ? Reverse 
• ???????? ????? ???? ??? ?????????? ?? ???? ??
  ????? ? ?? ????????? ?? ???? ?? ????? ? ???? ???
  ??? ?? ????? ????? ?????????? ???? ?? ????? ?? ??
  ??? ?? ???? ??? DNA? ???? ??? ?????. ??
  ???????? DNA ?? ???? ?? ???? ?? ??? ??????
  ?? PCR ???? ???? ???
• . ???????? ?? ??? ????? ?? ????? ??? ??? ?? ???
  ??? ?? ?? ???? ????? ??? ???? ??????? ? ??? ???
  ?? ?????? ????? ????? ????? ?? ????? ?? ????
• . ???? ????? ???????? ???? ????? PCR ?? 100 ????
  ????? ?? ?? ????? ????? ?????? ???. ???? ??? ??
  ???? ???? ?? ????? ????? ??? ??????? ?? ???.
• ??? ????? ???????? 18-24 ??? ????.
• TM ??? 52 ?? 65 ???? ????? ???? ????? ??? .
• ????? TM ???????? ?????? 5 ???? ????? ???? ???? .
  
• ???? ??? ???? ? ?????? ?????? ?? ?? ?? ?? ???
  ????? ???? ? ????? ???? .
• ?????? ?? Blast ???? .)(????? ????????)
• ????? ?????? TM
• TM(AT)2(GC)4
• ?????? ???? ?????? 3-5 ???? ???? ?? TM ??? .
• ??? ????????? ???? ???? ?? ????? ?????? ?? ?????
  ?? ????. ??? ?? ????? ?????? ???? ??? ???? ???
  ????????? ????? Blast ???? ?? ?? ???? ?? ???? ???
  ?? ?? ?? ?? ??? ????? ?? ??????Anneal ?????.

8
Melting Temperature Tm the temperature at
which half the DNA strands are single stranded
and half are double-stranded. Tm is
characteristics of the DNA composition Higher
GC content DNA has a higher Tm due to more H
bonds.
9

•  Taq DNA polymerase-4
• DNA ??????? ?????? ??? ??????? ??? ???????????
  ???? ??? ?? ??? (???? ???? ?????? ????? ?????????
• (Thermus aquaticus) ) ??? DNA ???????
  94??????????? ?? ???? ?? ????? ????? ???? ?? ????
  ????? Taq ??????? ?????? ?? ??? ?? ???? 94 ???? ?
  ????? ???? ?????? ?????? ??? ? ???? ?????? ??? ??
  ??? 72 ???? ? ????? ???? ?? ???????? ??? ????
  ????? ???? ??? ????? ?? ???? ??? ??? ?? ????
  ?????? ??? ???? ?? ????? ?? ???? ???? ??????? ??
  ????? ????? ?????? ?? ???? ????? ??? ????? ?????
  DNA ? ????? ????? ????? ??? ???????? ?????
  ?? ??? ?? ????? ????? ????? ???? ????? PCR ?? ???
  ?? ???? ????.
• . ????? 2????? ?????? ???
• 1-????????  DNA ?? ???? ?? ?? ?? ??? 5?    ?? 3?
  ? 2
• -????????????   DNA ?? ???? ?? ?? ??
  ??? 5?  ??  3? ? ????? ????
• ?? ??????? ?? ??????????? ,???? ????? ?? ????
  ?????? ???? ?? ?????? ???? ???.???? ?  DNA ??
  ???? ?? ?? ?? ??? 5? ??   3? ?? ????? ???? ????
  ??????? ???? ?? ??? ? ???? ???? ?? ??
  ??? 3???   5? ?? ????.

10

• ????
• ???? ????? ????? ?????? ?? ?? ??? pH ? ??????
  ????? ????? ????? ?? ??????? DNA ??????? ? ??????
  ????? ?? ????? ???. ????? ??? ???? ??? ??? ?????
  ??? ????? ?? ???? ????? ?????? ?? ?? ????? ??????
  ?? DNA  ???? (?????) ??? ?? ???.
• ?? ??????? ???? tris-HCL ??? KCL ?? ??????? ??
  ????? ?????? ?? ???? ???? ??? ???.
• -6 ?????? ??? ?? ??????(??? ??? ?????? ?? ?????)
  ? ?????? ??? ?? ??????(??? ??????
• ????? ????? ????? DNA  polymerase ???? ??????
  ??? ?? ??? ??? ???? ????? ? ??? ??? (?????? ??
  ???? ????? ????? ??????(Mgcl2)) ???? ????? ??????
  ? ???? DNA ???? ???. ???? ?????? ?? ??? ?????
  ???? ????? ?????? ??? ?? ???? ???? ??? (????? ???
  ???????) ???
• ???? ????? ??? ??? ??? ???? ??? ?? ???? ??????
  ????? ? ????? ????? ???? ???? ??? ???? ???.
• -7 ???? ?????  mineral oil
• -???? ??????? ?? ????? ????? ?? ?????? ????
  ?????? ? ?? ????? ?????? ???? ?? ??? ??? ??????
  ?????? ?????? ?? ???? ???? (?????? 50 ?? 60
  ????????? ?? ????? ????? 100 ??????????) ?? ???
  ????? ????? ?? ???. ?? ?????? ??? ?????? ?? ?????
  ??? ?????? ??????? ?? ???.
• ?? ??????? ???
• 8

11
 -?????????? ?????? ?????????? (????? ????? ????
??? ?????) ???? ?????? ???? ???? ????? ??????
????? ?? ??? ???? ???? ??? ?? ????. -9 ???? ????
??????? ????? ???? (???? ??????? ?????? ???? ????
???? ???? ????? PCR ?? ????? ?????????)? ??? ?? ?
????? ????? ????? ????? ?????? ?? ?????) ??? -??
???????? ?? ???? ????? ????? ?? ????? ???? ????
?? ???)? ????
Thermocyclers
12
??????? ???? ??????

• ????? ??? ?? ?????? ????? ??????? ?? ???? ????
  DNA ? RNA ?? ????. ?? ??? ??? ????? ?????? ???
  ?? ??????? ?? 1) ????? ????
• ???? ??? ??????(??? ?????- ???? ?????? ??????)
• ???? ??? ????? (??????? ? ??????)
• ?????? ?? ?? ???? ?? ??? ???? ?? ??? ????
• 2) ???? ???? DNA ? RNA
• ???? ??? ???? ? ???? ???? ?????? ?? ???.
• 3) ??? ???? DNA ?RNA
• 4) ???? ??????? ?? (??????? ?? ??? ? ?? ?????
  ??? ???? ??? ??? ?????)
• 5) ??????? DNA ? RNA ?? ?????? (??????? ??
  DNase ? RNase)
• 6)???? ???? ?????? ?? ???
• 7) ??????????????(??? ????? ???????)

13
PCR PROCESS

• Denaturation 15 Sec- 2 min 95 C
• Annealing 30- 60 Sec
  40-60 C
• Extension 1-2 min 72
  C

• jhj

14
?????PCR
15
?????PCR

• 1- ????? ?????? (Denaturation step)
• ????? ????? ???? ?? ???? ??? ?????? ???? ??? ?
  ???? ????? ???? ????? ?? ??? ?? ?? ?? ????? ??
  ???? ?? ?? ?? ???? ???. .
• ?? ??? ????? ???? ????? ???????? ???????? (???
  ???????????)? DNA? ???? ?? ?? ??? ?? ???? ? ??
  ???? ??? DNA ???? ?? ????.

16

• 2- ????? ????? (Annealing step) 
• ???? ????? ?? ??? ?? ?? ?? ????? ??50 ?? 60 ????
  ???? ?? ????.
• ?? ??? ??? ?? ???? ?? ?????? ???????? ?????? ??
  ?????? ???? ???? ??? ??? ????? ??? ???? ????
  ????? ???? ????? ?????? ?????? ??? ???? DNA ??
  ??? ??????(Primer) ??? ?? ?? DNA? ?? ???? ?? ????
  ???? ?? ????.
• ???? ????? ?? ???? ? ??? ? ???? ????? ?? ?? ????
  ??? ???????? ???

17
3- ????? ???????????? ?? ???? ???
(Extension/elongation step) ????? ??????? ?? ??
????? ?? ?????? ??????- ????? ?? ????? ????
??????????????? ???? ????????????? ????? ?? ?????
?? ??? ????-OH  ?? ???????? ?????? ???? DNA ??
???? ???? ? ???? DNA? ???? ?? ?? ??? ?? ?? ?? ?
?? ????? ???? ??? ???? ??????. ???? ????? ?? ???
????? ???? ?????? ?? ??? DNA ??????? ???? ???????
????. ???? ?????? ???? ????? Taq
polymerase ???? ?? ??? ?? ???? ??? ?? ??????
???? ?? ???? ?????? ?? ???. ??? ???? ??? ?????
??? ???? ?????? ?? ??? DNA ???????? ????? ??????
??? ???????? ? ??? ???? DNA ????. ?? ????
?????? DNA ??????? ?? ?? ?????? ?? ???? ??? ??
???????? ?? ?????. ?? ????? ???? ??? ?? ???? ????
???????? ???? ? ????? ????? ?????? ????? DNA ??
????? PCR ?? ????? ?? ???.
18

• - ????? PCR ??? ?? ???? ???
• ??? ?? ??? 3 ?????? ???? ??? ???? ??????
• ? ?????? ???? ???? ????? ???? ??? ???.
• ???? 3????? ?? ??? 30???????? ? ?? ??30???? 2 29
  ??? ?? ???? ???? ??? ????? ?? ???.
• ??? ?? ????? ? ??? ???? DNA ?? ????? ???? ???
  ????? ??? ???? ?? ??? ????? ???? ???? ? ???? ????
  ?????? ???? ???? ????.
• ??? ???? ????? ??? ?? ??? ? ?? ????? ??? ????
  ????? ?? ???? ? ?? ????? ? ??? 16 ????
• ? ?? ???? ???? ?? ????? ???????? ?????
  ???? DNA ???? ??? ?? ??? ?????? ? ?? ????n2
  ?????? ?? ???? ?? n ????? ???? ??? ????? ???.

19

• - ????? ???? ??? ????? (Final elongation)
• ??? ?????? ?? ?? ????? ???? PCR?
• ??? ??? ? ??? ?? ????? ?? ???? ?? ??? ?? ????
  ????? ?? ????
• ?? ??????? ???? ??? ?? ??? ?? ????
  ??? DNA ?????? ???? ??? ???.
• ???? ???? ?? ? ????? ????? ???? ????? ?????? ??
  ????
• ???? ??? ???????? (Tm)? ??? DNA ???????? ????
  ?????? ?? ?????? ? ???? dNTP?? ???.

20
(No Transcript)
21
7?????? (detect) ????? PCR

• ??? ???? ????? ?? PCR ??? Post PCR ?? ????
  ?????????? ?? ?? ?? ?????
• ?????? ?? ???? ??? ????? PCR ?? ?? ????
  ?????????? ?? ?? ????? ?? ??? ?????????? ??????
  ??? ????? PCR ?? ????? ????????? ??????? ????)?
  ?????????? ????? ????? ?? ????? ??? ???????(DNA
  lader ?? ???? ????? DNA ?? ?????? ??? ???? ???) ?
  ?? ??? ????? ??????? ??????? ????? ????.????
  ?????????? ???? ????????? ????? ???? ??? ???????
  ? ??????? ?? ?? ???? ?????? ???? ??? ? ??? ?? ??
  ????.
• . ?? ????? ?????????? ?? ???? ??? ??????? ??
  ?????????? ???? ???? ?? ?? ??? ?? ????? ?? ??? ?
  ????? ??? ???? ?????????? ???? ?? ???? ?? ???.
• ?? ?????????? ???? ???? ?????????? ?? ?? ????
  ????? ?? ???? ???? ????? ? ??? ????? ?????
  ???????? ???? ?? ????.
• ???? ?????????? ?? ?? ??? ??? ???? (???) ? ?? ???
  ???? ??? ???? (????) ?????
• ??? ?? ????? ?? ??? ???? ????? ???? ???? ?? ??
  ??? ??? ???? ? ??? ????? ??? ???? ????? ???? ????
  ?? ?? ??? ??? ???? ???? ?? ?????
• .???? ??? ??????? ?? ???? ???? ???? ??? ????? ??
  Back Bone ???? ??? ???? ????? ? ?? ????? ?????
  ????? ?? ?????? ?? ??? ??? ???? ?? ??? ??? ????
  ????. ??? ???? ??? ?? ?? ?????????? ???? ???
  ??????? ????? ?? ??? ??? ???? ???? ?? ????.
• ???? ??? ??????? ?????? ?? ???? ?????? ? ?? ????
  ?? ???? ?? ????? ?? ???? ???? ???? ?? ????.
• ??? ?? ?? ?????????? ??? ????? DNA ?? ???? ?????
  ?????? ???? ? ???????? ?? ?? ?? ???? ?? ??????
  ???? ?? ???.?????? ?????? ???? ????? ????? ????
  ???? ????? ??? ????? ?????? ????? ????.
• ?????? ?? ?????????? ??? ?? ???? ?? ?????? ??
  ????? Ladder ?? ????. ????? Ladder ???? ????????
  ?? ??? ????? ?? ?? ???? ??? ?????????? ???? ??
  ???? ?? ?? ??? ??? ????? ???? ??? ???. ?? ???
  ???? ????? Ladder ?? ??? ?? ???? ??? ?? ??????
  ???? ?? ?????? ???? Ladder ????? ???? ?? ????? ??
  ?? ?? ??? ???? ? ?? ???? ??? ??????? ????? ????.
  ??? ?? ????? ????? ??? ????? ?? ???? ??? Ladder?
  ?? ???? ??? ?????? ????? ????? ?? ??? ??.

22
Agarose Gel Electrophoresis
23
????? PCR

• ????? ?????? ??????? ???? ????? RT-PCR ????? ????
  ???? ?????
•   BAX Dupont-Qualicon
• ??? ????? ?? ????? ??????? ?? ????????? ???? ????
  ?????? ?? ???? ?? ?? ???? ???? ?? ????. ?? ?????
  ??? ???? ??? ?? ??????? DNA ???? ???? ???. ?????
  ????? ?? ??????? ?? ??? ???????  SYBR Green
  I ????? ???? ?????. ???? ????? ? Campylobacter
  Listeria  monocytogenes? Salmonella   ?E.coli
  O157H7 ?? ???? ???? ???? ???? ????? ?? ???????
  ???? ??? ??? ????????? ??? ? ....?? ??? ???? ???.

24
 Food-proof Roch

•  
• ??? ????? ?? ????? ????? ?? ???? DNA ????
  ??Salmonella ? Listeria monocytogenes ?? ???? ???
  ? ????? ??? ????? ?? ???? ??? Hot start ??????.

25

• BioRad         
• ?? ??? ????? ?? ???? ????? ????
  ????? Salmonella ??? ?? ???????? ? ?? ??????
  ?????? ?????? ??????? ?? ????? ?? ???? ?? ?????
  ??????? ???? ?? ???????? ??? ??????? ??? ???.
  ??????? ????? ??? ?? ???? ?? ????? ??????? ?????
  ?? ?????..
• ????? PCR-ELISA ????? ???? ???? ?????
• Probelia Bio Rad
•  ??? ????? ????? ?? ????? ?????? ?? ????? PCR ??
  ????. ?? ????? ????? Salmonella ??? ????? ????
  ??? 3 ???? ?? 25 ??? ????? ?? ?? ???????? 99????
  ?? ?? 18 ???? ?? ????? ??? ??? ???? ????? ???. .

26
????? PCR

• PCR ???? ??? Allele specific PCR
• PCR ???? ??? ????? ??????? ?????? ??? ???? ??
  ??DNA ?? ?? ???.
• PCR ???????? Asymmetric PCR
• ?????? ???? ????? ??? ?? ???? ??? ?????? DNA ???
  ?? ??????? ?? ???? ??????? ?????? ?? ??????? ??
  ??? ?? ?????? ???? ?????? ???? ?? ??? ??? ???????
  ?? ??????? ?? ?????? ????? ?? ?? ???.
• PCR ????? Colony PCR
• ???? ?? PCR ??? ?? ?? ??? ????? ?? ??????? ????
  ????????? ??????? ?????.

27

• PCR ????? Degenerate PCR
• ???? ?? PCR ??? ?? ????????? ????? ?? ??? ?????
  ????? ???????? ?????? ?? ?????DNA ?????? ???? ??
  ??? ?? ????. ????????? ????? ?? ???? ??????? ??
  ?????? ??? ? ????? ???? ??? ????? ?? ????. ???
  ????? ??????? ????? ????? ?? ??????? ??? ?? ??
  ??? ???????? ?? ???????? ????? ?? ????? ???? ??
  ????.
• PCR??? ?????? Hotstart PCR
• ??? ????? ???? ????? PCR ???? ??? ??? ?????
  Taq??????? ????? ?? ????? ????? ????? ????? ??
  ???? ????? PCR ?? ???? ??? DNA ????? ???? ??? ???
  ???????? ?? ????? ??? ??????? ?? ?????? ?????
  ??????? ?? ???.

28

• PCR ????? Inverse PCR
• PCR????? ????? ????? DNA ?? ??? ?? ?? ?????
  ?????? ??? ?? ???. ??? ????? ??????? ?? ??? ?
  ????? ????? ????? ?? ????? ??? ?? ???? ?? ?????
  ????DNA ????? ?? ??? ?? ?? ???? ?? ????? ??????
  ??? ?? ?? ????? ?????? ????? ?????? ??? ????? PCR
  ??????? ???.
• PCR ???? ?????? Miniprimer PCR
• PCR ???? ?????? ?? ??? ??????? ??????? ???
  ??????? ????? DNA ?????? ??? ?? ????? ??? 16S
  rRNA(????????? 18S rRNA) ?????? ??? ?? ?? PCR
  ????????? ??? ???? ???.
• ?????

29

• PCR ??????? Multiplex PCR
• PCR ??????? ?? ????? ??????? ???? ????? ?? ?????
  ???? ?? ?? ?? ?? ???? ???. ??? ??? ????? ?? ?? ??
  ?? ????? ????? ???? ??? ???? ?? ??? ?? ?? ?????
  ???? ??? ????? ?? ????? ????? ???? ? ???? ?????
  ???? ???? ????? ???.
• PCR ?????? Nested PCR
• PCR ?????? ???? 2?????? ?? ?? ?????? ??? ?? ??
  ?? ?? ?? ????? ?? ???? ????? PCR??????? ?? ????.
  ?????? ?????? ??? ?????? ????? ?? ?? ?????? ???
  ??? ?? ???? ????? ????? ??? ?? ?????? ??? ??????
  ????? ?????. ?? ???? ?? ????? ???? ??? ?? ?????
  ???? ?? ????????? ?????? ????? ???? ?? ?? ??????
  ?????? ?? ????? ????.

30
???? ???????? (?ARMS-PCR?)

• ?- ??? ??? ?????? ??????? ???? ???? ???? ???????
  ??????? ???.
• ?? ??? ??? ?? ????????? ??? ????? ? ????? ?? ??
  ???? ??????? ??????? ??????.
• ??? ??? ???????????? ?? ???? ???? ?????? ?????
  ????? ???? ?????????? ???? ??? ??????? ?? ???
  ???? ??? ??? ? ??? ??? ???????????? ?? ????? ????
  ?????? ??? ????? ????? ???? ?????????? ???? ???
  ??????? ?? ??? ???? ??? ???.

31
????????? ????? PCR

• -1 ????? ?????????? ??? ?? ????
• ?? ??????? ?? PCR ? ?? ??? ????? ????????? ?????
  ?? ?? ?? ????? ? ????????? ????? ?? ?? ???? ???
  ??????? ?? ???? ?????? ????? ?????????? ??????
  ??????? ???. ???? ??? ??? ??? ?? ???? ???? ??
  ????????? ? ??? ?? ????? ???? ?? ???? 10 ??????
  ?????? ?? ??????? ???? ?? ??????? ???? ? ??
  ?????? ??????? ???? ?? ?? ?????? ????? ?? ?????
  ?????? ?????? ?? ????????? ?????? ????? ????????
  ?? ???? ???? ???? ?????? ???????(Cystic
  Fibrosis )? ???????? ????? ??  ?????? ????????
  ?????? ????? ??????? ???? ???? ???? ?...
• -2 ????? ????? ????
•  ?? ??? ????? ??? ???? ?? ??? ????? ?? ?????????
  ???? ???????? ? ?? ?? ?? ??????? ??? ????? ??? ??
  ???? ??????? ??? ?? ???? ?? ????? ???? ?? ????? ?
  10 ????? ????. ??? ?? ?? ???? ?? ???? ?? ??? ????
  ? ????? ?? ????????? ??????? ???? ???????? y ??
  ???? PCR ???? ?? ????. ???????? y ?????? ??
  ???????? ?? ???? ??????. ???? ???????? ?? PCR ??
  ????? ?????????? ? ?? ??? ??????? ???? ?????
  ??????? ????? ???? ?? ???. ??? ?? ?? ???? ?? ????
  ?? ( ???? ???????? y) ???? ????? ?????
  ???? DNA ???? ?? ????

32

• -3 ????? ?????? ??
• ?? ??????? ???????????? ?? ??? PCR ???? ???????
  ????? ????? ?? ? ????? ???? ??? ?????? ?? ???
  ?????? ??? ??????? ?? ???. ??? ?????? ?? ?? ???
  ????? ?????????? ????? ?? ????? ????????? ?? ??
  ??? ?????? ???? ??? ???? ? ?????? ???? ??????
  ????? ?????? ???? ?????? ?? ? ????????????? ??
  ????? ?????????? ?? ???. ????? ??????
  ????? PCR (?????? ??? ??? ?? ???? ????? ??? ???
  ????? ???) ?? ???? ???????? ?? ?? ????? ? ??? ??
  ???? ??????? ???? ????????????? ?? ?? ????? ?
  ??????? ?????? ?? ???? ???.
• - ????? ????? ? ????? ????? ????? ??
•  ?? ????? ?????? ???? ???? ????? (leukemia) ?
  ????? (lymphomas)? ???? PCR ??????? ?? ??? DNA?
  ????? ????? ?? ???,???? ??? ?? ?? ???? ???? ? ??
  ???? ??? ????? ???? ??????? ???? ?? ?? ???
  ??? PCR ???? ????? ? ??????? ???? ?? ?? ??????
  ????

33

• -5??????? ????????????? ???? ?? ???? ??? ??????
  ? ?? ???? ??? ???? ?? ???? ??? ???? ??? ???
• ?? ??????? ?? ???PCR  ? ?? ????? ???? ?? ??? ????
  ?? ?? ?? ????? ???? ???????????? (mycobacteria)?
  ????????? ??? ????? (anaerobic bacteria) ?
  ???????
• (viruses) ?? ????? ????
• ??????
• -6- ??????? ????? (forensic analysis)
•  ?? ???? ???? ?????? ????? DNA ????? ?? ???.
  ???????? ?? ??? PCR ?? ???? ????? DNA ?? ?????
  ??? ?? ?????? ???? ?? ?????? ??? ?????? ???? ???.
  ??? ????? DNA ????? ?? ???.
• -7 ????? ????? ????? (genetic fingerprinting)
• ?? ??? PCR ?? ???? ?? ???? ?? ????? DNA ?? ????
  ????? ?? ???. ?????? ???? ?????? ?? ??????? ??? ?
  ?? ????? ?????? ????? ?? ????? ????. ?????? ?????
  ?????? ??????? ???? ??? ?? ??? ????? ????? ??????
  ???? ?????? ???.

34

• -8 ????? DNA ????? (ancient DNA)
•  ?? ??? PCR? ????????? DNA ????? ????? ??? ?????
  ?? ?? ?? ???? ??? ??? ???? ?????? ???? ????? ???.
  ???? DNA ?? ????? ?? ??? ???? ???
  ???? ??????? ??? ???? ? ???? ????? ?? ??? ?????
  ????? ??? ???.
• 9- ??????? DNA? ?????
•  ?? ??? PCR ?? ???? ??? ???? ?? DNA? ????? ??
  ?????? ? ?? ?? ??????? ????? ????. ???? ????
  ??????? DNA ? ?? ????? ???? ??? ????? ????10-
• -10 ????? ????? DNA
• ?? ?? ????? DNA ?? ??? PCR? ?? ???? ?????
  ?????????? ?? ????? ??? ? ?? ???? ???? ?? ???????
  ?????? ?? DNA? ????????? ?? ???????? ?? ?????
  ???? ? ???? ????? DNA ? ??????? (recombinantDNA)
  ????? ???. ??? ?? ????? ??? ?? ???? ????? ??
  ??????? ?? PCR? ???? ??? ?????? ?? ?? ??? ????
  ??? DNA? ??????? ???? ????? ???? ???
  (hybridization probes)

35

• 11-????? ????? ??? ????????? ????? ?? ???? ???
  ??????? ????????????
•  ??? ?? ????? ??? ????? ???? ?????? ?????
  ???????? ???? ???? ??? ???? ??? ?????? ?? ????
  ??? ??????? ???? ????? ??? ???. ??????? ???????
  ??? ??? ????? ???? ?????? ?? ??? ????? ?????
  ???????? ??? ????? ??? ?? ?? ??? ?? ??? ???
  ??????? ?????? ? ?? ????? ???? ???. 
• 12- ????? ??????? ?? ?? ? ????? ????? ? ??? ?? ??
  ?? ??? ??????? ??? ?????
• ?? ????? ???? ????? ????? ? ??? ?? ?? ?? ?????
  ????? ??????? ?? ?? ???? ?????? ?????? ??????? ??
  ??? ?? ???????? ????? ?? ???????? ???? ? ?? ??
  ????? ?? ?? ???????? ?? ??? ???? ????? ?? ?????
  ?????? ?? ?? ?? ??? ?? ???????? ? ????? ?????
  ???????? ??? ??? ?? ?? ?? ???? ????? ? ?????? ???
  ?? ?? ?? ????? ???.
• 13-??????? ?????? ?? ???? ????? ( ?? ??????? ???
  ????? ? ???? ? ...)

36
 ??????? ?? PCR

• ???? ???? ????? PCR ?? ???T-A cloning  
• ??????? ?? ?? ?????? ?? DNA ?? ????? blunt ???
  ????? ??? ?? ???
• . ??? ???? ????? ??????? ?????????
  ?? Taq ??????? ?  dTTP ?? ??? T ?? ????????  OH-
  3 ?? ????? ??????
• ????? Ligation ?? ??? ????? ?? ????? PCR ?? ??
  ???????? OH- 3 ?? ??? A ???? ???? ????? ?? ????
• ?ltltltltltltltltltltltlt ??????? ?? ?? ?????? ???????? ?? ???

37
?????? PCR 

• ????? ?? ???? ????? ??
• ????? ?????
• ??? ????? ?????
• ??? ?????? ??????? ????
• ??????? ?? ????? ??????? ?????? ??
• ?????? ?? ???? ??? ?? ??????? ?? ????????????? ??
  ?? ????? ?????? ? ???????

38
????? PCR

• ?????? ???? ????
• ???? ?? ????? ? ???? ???
• ?????? ????? ?? ?? ?? PCR??????? ?? ?? ???? ????
  ??????? ???? ??? ??????? ???????? ??????
  ????????????? ? ??? uv ???? ?? ??? ?? ????? ??
  ?????.
• ????? ????? ???? ????? ?? ????????????? ????
  ????? ????????

39
 ???? PCR ? ??? ?? ??

• ????? PCR ? ?????? ????????? ???? ????? ????
  ????? DNA ????? ???. ??? ???? ?? ???? ??????? PCR
  ?? ????? ????? ????? ???? ? ??? ????? ?? ?? ??
  ???? ?????? ???? ?????? ?? PCR ????? ???? ????
  ????? ????? ???.
• ???? ??? ???? ?????? ?? ???? ????? ???? ???????
  ??????. ???? ???? ??? ?? ??????? ??????? ???????
  ?? ??????? ? ????????? ????? ?? ????? ???????????
  ??????? ???????.
• ??? ?? ??????? ???????? ????? PCR ????? ??
  Nestied PCR ???. ?? ??? ??? ?? ??????? ?? ??
  ?????? ??????? ?? DNA ?? ????? ??????? ? ???
  ??????? ???? ?? ???? DNA???? ????? ??? PCR
  ??????. ???? ???? ?????? ?????? ???? ???????.

40
?????? ???? ? ??? ??? ????? ?? ??? ??????
????? ??

• Taqman probe based multiplex RT-PCR for
  simultaneous detection of Listeria monocytogenes,
  Salmonella spp. and Shiga toxin-producing
  Escherichia coli in foods
• Author links open overlay panelDamkerngBundidamorn
  abWannakarnSupawasitaSudsaiTrevanichab
• https//doi.org/10.1016/j.lwt.2021.111696Get
  rights and content
• Efficient capturing and sensitive detection of
  hepatitis A virus from solid foods (green onion,
  strawberry, and mussel) using protamine-coated
  iron oxide (Fe3O4) magnetic nanoparticles and
  real-time RT-PCR
• Author links open overlay panelRuiqinWuab
• BaozhongMengcMilenaCorredigaMansel W.Griffithsab
• https//doi.org/10.1016/j.fm.2021.103921Get
  rights and content
• MOL-PCR and xMAP Technology A Multiplex System
  for Fast Detection of Food- and Waterborne
  Viruses
• Author links open overlay panelJakubHrdy
• PetraVasickovaMichaelaNesvadbovaJiriNovotnyToma
  sMatiPetrKralik
• https//doi.org/10.1016/j.jmoldx.2021.03.005Get
  rights and content
• Detection of species adulteration in meat
  products and Mozzarella-type cheeses using duplex
  PCR of mitochondrial cyt b gene A food safety
  concern in Bangladesh
• Author links open overlay panelMst.Afifa
  khatunArzinaHossainMd. ShakhawatHossainM.Kamruzzam
  an MunshiRoksanaHuque
• https//doi.org/10.1016/j.fochms.2021.100017Get
  rights and content
• Under a Creative Commons license
• open access

41

• RAPD PCR and actA based molecular typing of L.
  monocytogenes isolated from human, food and
  domestic animals in northwest of Iran
• Author links open overlay panelAzarHemmatiaKambizD
  ibabSaraParvinaElnazOhadicBehroozSadeghi
  KalanideLidaLotfollahia
• https//doi.org/10.1016/j.mgene.2020.100790Get
  rights and content
• Simultaneous enumeration of Cronobacter sakazakii
  and Staphylococcus aureus in powdered infant
  foods through duplex TaqMan real-time PCR
• Author links open overlay panelXueqinXiea
• ZhouLiuabc
• https//doi.org/10.1016/j.idairyj.2021.105019Get
  rights and content

42

• Rapid and absolute quantification of VBNC
  Cronobacter sakazakii by PMAxx combined with
  single intact cell droplet digital PCR in infant
  foods
• Author links open overlay panelXinruiLvab1XiaokuiG
  ub1LiWanga
• XiaoxinHeaChunaiHeaJingfengZhangaLichaoZhaoa
• https//doi.org/10.1016/j.lwt.2021.111388Get
  rights and content
• Virtual system for early detection of COVID-19
  infection Etaware-CDT-2020 prototype design
  (corroborated by rRT-PCR data)
• Author links open overlay panelPeter
  MudiagaEtaware
• https//doi.org/10.1016/j.bspc.2021.103337Get
  rights and content

43

• 3.10 - Molecular Detection of Viruses in Foods
  From PCR to High-Throughput Sequencing and Beyond
• Author links open overlay panelDavidRodríguez-Láza
  roaGislaineFongarobDoris SobralMarques
  SouzabMartaHernándezc
• https//doi.org/10.1016/B978-0-08-100596-5.22839-4
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• Food Toxicology and ForensicsChapter 6 -
  DNA-based methods for species identification in
  food forensic science
• Author links open overlay panelM.A.
  MotalibHossain1Syed Muhammad KamalUddin1SharminSul
  tana1AbuHashem1MyrtoRizou2Turki
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  RafieJohan1
• https//doi.org/10.1016/B978-0-12-822360-4.00007-8
  Get rights and content
• Chapter 7 - Polymerase chain reaction as a key
  technique in food safety, forensics, and
  bioterrorism prediction recommended validation
  guidelines
• Author links open overlay panelGhada AliOmran
• https//doi.org/10.1016/B978-0-12-822360-4.00010-8
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• -5Dr Margaret Hunt, University of South
  Carolina,, Real Time PCR
• Julie Logan, Kirstin Edwards and Nick Saunders,
  January

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