Diana Trujillo

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• Diana Trujillo
• Universidad San Francisco de Quito
• Laboratorio de Biotecnología Vegetal

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Introducción del mortiño

• Especie Vaccinium floribundum Kunth
• Familia Ericaceae
• Baya que crece en el norte de Sudamérica (Ecuador
  y Colombia)
• Fruta pequeña, de color azul y sabor agrio
• Similar al Blueberry
• Noviembre se usa en la colada
  morada para el Día de Los Difuntos

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Justificación

• Crece en el páramo del Ecuador
• Crece de forma silvestre
• Se vende comúnmente en los mercados locales de
  Ecuador
• Si se expande su producción, podría tener un
  nicho en el mercado

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Justificación

• Hay iniciativas con comunidades para desarrollar
  microempresas en torno al mortiño
  (Sigchos gt mermeladas)
• Es más agrio que el blueberry, pero podría
  tener una aplicación similar
• Sería necesario optimizar su propagación (así
  como la calidad del fruto)

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Qué es el cultivo in-vitro?

• Técnica de cultivo de plantas bajo condiciones de
  asepsia y con condiciones controladas
• Medio de cultivo
• Nutrientes
• Azúcar
• Reguladores de crecimiento (Citoquininas,
  auxinas)
• Agua
• Importancia de la aclimatación

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Cultivo in-vitro del mortiño

• El mortiño es un arbusto, es
• una planta leñosa
• El medio de cultivo se llama WPM (woody plant
  medium)
• Se necesita hormonas más fuertes como la
  trans-zeatina riboside

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Desinfección de las yemas

• Objetivo obtener material vegetal libre de
  microorganismos
• Esterilización
• Etanol 70 por 3 min
• Hipoclorito de sodio (Clorox) 2.5 Tween 20 por
  10 min
• 3 lavados con agua destilada
• Los segmentos de tallo esterilizados se siembran
  en el medio de cultivo

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Brotación de yemas

• Objetivo crecimiento de las yemas axilares para
  iniciar el cultivo
• Inicialmente se probó los siguientes medios para
  la brotación de yemas
• mWPM sin hormonas
• mWPM BAP (citoquinina promueve ramificación)
• BAP 1 pmm
• BAP 3 pmm
• BAP 5 pmm
• mWPM NAA (auxina promueve división celular)
• NAA 3 pmm
• mWPM BAP NAA
• BAP 5 pmm NAA 0.02 ppm

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Brotación de yemas

• También se probó medios con citoquininas más
  fuertes
• 2iP
• 2iP-1 ppm / 2iP-1 ppmNAA-0.05 ppm / 2iP-1
  ppmNAA-0.1 ppm
• 2iP-3 ppm / 2iP-3 ppmNAA-0.05 ppm / 2iP-3
  ppmNAA-0.1 ppm
• 2iP-5 ppm / 2iP-5 ppmNAA-0.05 ppm / 2iP-5
  ppmNAA-0.1 ppm
• trans-zeatina riboside
• TZR0.5 ppm
• TZR1 ppm NAA-0.05 ppm / TZR1 ppm NAA-0.1
  ppm
• TZR3 ppm NAA-0.05 ppm / TZR3 ppm NAA-0.1
  ppm
• TZR5 ppm NAA-0.05 ppm / TZR5 ppm NAA-0.1
  ppm
• TZR7 ppm NAA-0.05 ppm / TZR7 ppm NAA-0.1
  ppm

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Propagación

• Objetivos
• Continuar crecimiento en yemas que brotaron
• lograr una multiplicación rápida de plantas
  saludables
• Se probó concentraciones de 2iP sólo o en
  combinación con NAA
• 2iP 3 ppm
• 2iP 3 ppm NAA 0.1 ppm
• 2iP 5 ppm
• 2iP 5 ppm NAA 0.1 ppm

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Resultados Desinfección

• En todos los tratamientos de desinfección
• 1 ó 2 plantas de cada frasco se contamina
• Desinfección muy fuerte causa necrosis de los
  explantes
• No se encontró un protocolo de desinfección
  totalmente eficiente
• Solución al problema Introducción de explantes
  individuales en frascos de antibióticos

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Resultados mWPM con BAP/NAA

• En todas las concentraciones
• Poco crecimiento de las yemas
• Eventualmente se muere todo el explante

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Resultados 2iP

• Brotación de yemas
• Sólo brotaron 2 de 54 explantes en 2iP
• Se demoró mucho tiempo en brotar
• 70 días
• Crecimiento lento

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Resultados trans-zeatina riboside

• En 0.5 ppm de trans-zeatina ribóside
• Hay poca brotación yemas crecen 1 mm
• 22 días
• No se elonga
• Eventualmente se muere todo el explante

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Resultados trans-zeatina riboside NAA

• En TZR NAA
• 23 días se empieza a ver brotación
• Hay abundante brotación
• Yemas verdes en buen estado
• No se elonga

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Resultados propagación en 2iP

• Se ve multiplicación y cierta elongación en todas
  las concentraciones de 2iP
• Hojas verdes en buen estado

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Siguiente paso Elongar y enraízar

• Se pasó las plantas a medios sin reguladores de
  crecimiento
• Hasta el momento, sólo se observó elongación
• Todavía no se observa enraizamiento

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Siguiente paso Aclimatación

• Pasar la planta desde el cultivo in-vitro a
  tierra
• La planta pasa desde un ambiente favorable a uno
  no tan favorable
• Se debe acostumbrar (aclimatar) a la planta para
  que sobreviva

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Conclusiones

• Fue necesario usar hormonas muy fuertes para el
  establecimiento del cultivo in vitro del mortiño
  a partir de yemas axilares ? planta leñosa
• Trans-zeatina ribóside NAA ? abundante
  brotación y yemas verdes en buen estado
• Se logró una propagación in-vitro del mortiño
  rápida y eficaz, una vez que se estableció el
  cultivo ? se usó 2iP para la propagación
• Resultados preliminares en medio basal sin
  hormonas ? hay elongación pero todavía no se
  observa enraizamiento

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Recomendaciones

• Establecer el cultivo en trans-zeatina ribóside y
  luego pasar a 2iP
• Es necesario optimizar la fase de enraizamiento y
  aclimatación antes de que se pueda usar esta
  técnica para cultivos comerciales del mortiño

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Proyecciones

• Establecer un protocolo estandarizado para la
  propagación in vitro
• Aclimatar las plantas de mortiño
• Llevar hasta el campo

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Gracias!Preguntas?